牛肝菌和羊肚菌复合水提取物对酒精性肝损伤保护作用的研究及口服液的制备

发布时间：2020-09-03 17:02

　　牛肝菌(Boletus edulis)和羊肚菌(Morchella esculenta)均是经典的药食两用真菌,根据文献报道,牛肝菌对体内抗氧化作用具有积极意义,而羊肚菌则被证实对因酒精引起的急性胃黏膜损伤具有保护作用。本论文尝试进行牛肝菌和羊肚菌复合水提取物对肝保护活性的研究,并将其制备成牛肝菌和羊肚菌口服液。主要研究工作如下:首先,根据本实验室前期的工作结果,将牛肝菌与羊肚菌菌粉按照2:1的比例进行混合制备复合水提取物。在实验过程中将复合水提取物中的多糖作为检测指标依据,最终确定了牛肝菌和羊肚菌复合水提取物的最优工艺结果为:温度为80℃、热水浴时间为2 h,料液比达到1:20 mgmL~(-1),并提取两次,这时牛肝菌和羊肚菌复合水提取物的多糖提取得率达到最高。接着,又对牛肝菌和羊肚菌复合水提取物进行进一步成分测定,结果显示提取物中还包括还原糖、蛋白质、氨基酸、有机酸、脂肪酸、甘露醇等多种生物有效活性成分。在此基础上,本论文初步探究了牛肝菌和羊肚菌复合水提取物对ALD的保护作用。通过使小鼠摄入大量酒精从而建立ALD模型,将水飞蓟宾素作为阳性对照得出牛肝菌和羊肚菌复合水提取物可以显著降低由于酒精过量摄入而导致的ALT以及AST指标的升高。随后又进行了氧化应激相关水平的检测,发现复合水提取物可以提升由于过量的酒精摄入而导致的抗氧化酶类SOD、GSH-P_X活性的降低。另外MDA是脂质过氧化的重要产物之一,而TG水平的高低也是衡量肝功能的重要依据。通过实验也可以发现复合水提取物的确可以使因酒精过量摄入而升高的指标下降。从结果观察,牛肝菌和羊肚菌复合水提取物不仅可以提高机体的抗氧化功能降低脂质过氧化,还能改善肝细胞的损伤程度。最后,对复合水提取物口服液的制备进行研究。确定最佳制备工艺为:10%的壳聚糖作为澄清剂,并在60℃的条件下设置搅拌速度为650 r/min,0.4 g/kg山梨酸钾,浓度为3%的羟丙基-β-环糊精。此时口服液的外观性状都达到最好。根据口感评价确定了当5%木糖醇的情况下时加入0.063 g柠檬酸的口味以及在5%砂糖的情况下加入0.077 g柠檬酸的口味大家觉得更适宜可口。另外又对口服液稳定性做了考察,根据光照实验、室温实验以及加速实验结果,认为复合水提取物口服液适宜在室温或低温避免光照的条件下进行保存。本论文认为牛肝菌和羊肚菌复合水提取物可以降低氧化因子含量,提高抗氧化作用从而抑制因酒精引起的脂质过氧化,起到保肝效果。这一结果也将会为后续对牛肝菌与羊肚菌的活性功能评价的工作奠定基础。
【学位单位】：吉林大学
【学位级别】：硕士
【学位年份】：2019
【中图分类】：R943;R965
【部分图文】：

基本途径,乙醛,途径,氧化分解

心、呕吐、行动笨拙、语言表述含糊不清、步态不稳等，如若严重还会引起昏迷、休克甚至死亡[4]。1.1.2 酒精性肝损伤发病机理酒精进入到人体被吸收之后，被胃吸收一小部分，其余大部分酒精会被大肠吸收并通过门静脉运输至肝脏进行代谢[5]，如图 1.1 所示。酒精的代谢主要有三种方式，第一种途径也是最主要的是乙醇通过乙醇脱氢酶（ADH）分解成乙醛后再进行水解消除；第二种途径尤其是在酒精含量达到比较高浓度时，则涉及到微粒体乙醇氧化系统（MEOS）,其中还包括有细胞色素 P450 来参与代谢[6]；第三种途径是由 Handler 等人建立通过过氧化氢酶（Catalase）进行氧化分解[7]。这三种途径的中间步骤都是将乙醇首先分解成乙醛，再通过乙醛脱氢酶（ALDH）来进一步氧化分解成毒性较低的醋酸盐。

标准曲线,标准曲线,葡萄糖

配制葡萄糖标准溶液（0.2 g/L）：称取 0.05 g 烘干后的无水葡萄糖，溶mL 容量瓶内并用水定容。将溶液充分混匀后精确称取 10 mL，再用去离至 50 mL 后放置-4℃备用。.3.2 葡萄糖标准曲线的绘制精确吸取葡萄糖标准溶液 0.0 mL、0.2 mL、0.4 mL、0.6 mL、0.8 mL 和 1试管中，分别用去离子水将溶液定容至 1.0 mL。在避光的条件下向每各加入 5%的苯酚溶液 1.0 mL 和浓硫酸溶液 5.0 mL，混匀。静置 10 m30 ℃水浴中冷却。将测得的吸光度值于 490 nm 的波长处检测吸光度，并萄糖标准品浓度做为横坐标，吸光度值做为纵坐标，以此为依据绘制成图，再根据计算得到线性回归方程。以葡萄糖标准溶液浓度（c，mg/横坐标，以溶液 490 nm 处的吸光度（A）作为纵坐标，绘制标准曲线 2.1 所示。

水提取物,提取温度,对复合

图 2.2 提取温度对复合水提取物中多糖得率的影响 2.2 Effect of extraction temperature on yield of polysaccharides in composite water ext由图 2.2 可以看出，当固定水浴时间为 2 小时并超声 15 min，料液比为mL-1，提取一次作为条件时，温度在 60 ℃到 80 ℃内提取浓度逐渐升高到 80℃之间迅速上升，在 80 ℃时达到最大值。而随着温度逐渐升高，反而降低。这可能是因温度太高导致多糖的结构和性质发生变化，致使降低。因此，确定 80 ℃为最佳提取温度。.2 提取时间对复合水提取物中多糖得率的影响准确称取 1.0 g 混合菌粉，同样使用去离子水作为溶剂，将在 80.0 ℃的进行加热并超声 15 min，料液比为 1:20 mgmL-1作为条件。分别设置 0h、1.5 h、2.0 h、2.5 h 和 3.0 h 作为变量进行检测，提取一次。再根据吸复合水提取物中的多糖浓度并计算多糖的得率。实验结果如下图 2.3 所

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