质谱法直接区分和测定恩替卡韦立体异构体及其机理研究

发布时间：2020-09-21 19:32

　　 恩替卡韦(entecavir,ETV)是一种乙肝病毒多聚酶抑制剂,其结构中有3个手性中心,可产生8个手性异构体,而临床用药有效构型为单一的(1R,3S,4R)构型,本文旨在建立一种新型质谱法实现对ETV八个立体异构体的区分和定量测定,并通过理论模拟计算研究其区分机理。根据质谱动力学方法,在质谱电喷雾离子化过程中形成含有手性化合物、手性配体以及金属离子的配合物母离子,然后在一定碰撞能量下进行碰撞诱导解离。解离反应中母离子竞争性丢失一分子分析物和手性配体,两种解离途径的解离速率与混合物的对映体组成相关,从而可对手性化合物光学纯度进行测定。通过筛选合适的手性配体和金属离子与分析物ETV配位,形成三元配合物进行质谱分析。在进行二级质谱分析时,设置二价配合物离子[M2+(A)(ref*)2]2+(M2+=二价金属离子,A=分析物,ref*=手性配体)为母离子,通过对比特定子离子相对丰度比值的差异实现ETV手性异构体之间的区分。理论计算在密度泛函理论基础上选用B3LYP函数以及6-31g*和LANL2DZ基组对ETV及其手性异构体的分子结构进行优化。然后通过比较两个竞争性反应的自由能差值△△G、不同配合物结构空间构型以及键长和二面角,研究该方法区分手性异构体的机理。具体研究结果如下:1、通过筛选实验发现金属离子Zn2+和手性配体R-贝西沙星(R-Besivance,R-B)与ETV络合时,可产生稳定的二价配合物离子[Zn2+(ETV)(R-B)2]2+,而且在一定碰撞能量下可以产生动力学裂解反应的产物子离子[Zn2+(R-B)ETV-H]+(m/z 733)和[Zn2+(R-B)2-H]+(m/z 849)以及[R-B+H]+(m/z 394)和[ETV+H]+(m/z 278)。2、选用Zn2+和R-B配位对ETV及其立体异构体有较高的区分度,当选择目标子离子的丰度比值作为比较指标时,可实现ETV八个手性异构体的区分,在不同仪器上实验结果具有重复性。3、选择[Zn2+(R-B)ETV-H]+(m/z 733)和[Zn2+(R-B)2-H]+(m/z 849)以及[R-B+H]+(m/z 394)和[ETV+H]+(m/z278)离子进行定量分析时,发现目标子离子丰度比值的自然对数与异构体含量的比例之间呈现良好的线性关系,用于检测ETV原料中立体异构体杂质的结果与美国药典方法的检测结果一致。4、理论计算获得的ETV各手性异构体与Zn2+和R-B配位形成的配合物的优势构型支持本实验结果。本文建立的质谱动力学方法可用于手性杂质的区分而不需要昂贵的色谱柱和复杂的样品前处理,具有简单、快速的特点,可以用于多手性中心药物的异构体杂质检测。
【学位单位】：浙江大学
【学位级别】：硕士
【学位年份】：2018
【中图分类】：R914

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本文编号：2823902