Fn14受体激活在ALI炎症失控中的作用研究

发布时间：2020-10-08 22:51

　　目的:急性肺损伤/急性呼吸窘迫综合症(ALI/ARDS)是一种非心源性,急性发作,同时伴有双肺炎症浸润及难治性低氧血症为特征的临床危急重症之一。目前尚缺乏有效的治疗手段,ALI的病死率高达35%-46%。近年来研究发现,成纤维细胞生长因子诱导的早期反应蛋白14(Fn14)与炎症的发生发展有密切关系。但该受体是否参与ALI的发生发展尚无报道,本研究拟探讨Fn14受体激活在LPS诱导的小鼠ALI中的作用。方法:采用气管滴注脂多糖(LPS,5 mg/kg)复制小鼠ALI模型,治疗组于造模前1 h腹腔注射Fn14阻断剂金精三羧酸(ATA,20mg/kg),小鼠于造模12 h后处死、取材。观察阻断Fn14致死剂量LPS诱导的ALI小鼠存活率的影响;HE染色和肺组织炎症评分评价小鼠肺组织的病理改变;检测血清中LDH活性;细胞计数法检测支气管肺泡灌洗液中炎性细胞的数目和检测肺组织髓过氧化物酶,观察肺内炎症细胞浸润情况;RT-PCR检测IL-1β、TNF-α、MCP-1的基因表达;Western Blot方法检测Fn14和pro-IL-1β的蛋白表达情况;ELISA方法检测肺组织中TNF-α、IL-1β蛋白含量以及支气管肺泡灌洗液中TNF-α、IL-1β、MCP-1的蛋白表达情况;结果:Western blot检测结果显示Fn14在ALI小鼠肺组织中表达上调。采用Fn14的特异性阻断剂ATA阻断Fn14可提高致死剂量LPS诱导的ALI小鼠生存率;阻断Fn14可减轻LPS诱导ALI小鼠肺组织病理改变及炎症评分;阻断Fn14可减轻细胞损伤;阻断Fn14可减少炎性细胞浸润;阻断Fn14可下调促炎细胞因子TNF-α和IL-1β的表达与分泌;亦可以减少单核趋化因子-1的表达与分泌。进一步研究发现,阻断Fn14可以降低脂质过氧化产物MDA含量并部分提高抗氧化物酶SOD活性。结论:1.Fn14受体激活参与急性肺损伤的发生发展;2.阻断Fn14受体激活可以减轻ALI肺内炎症反应。
【学位单位】：南华大学
【学位级别】：硕士
【学位年份】：2018
【中图分类】：R965
【部分图文】：

小鼠,急性肺损伤,发生发展,统计学意义

实验结果1 Fn14 在急性肺损伤小鼠肺组织中的表达我们首先在急性肺损伤小鼠肺组织中通过 Western Blot 检测 Fn14 蛋白的含量，结果显示 Fn14 在急性肺损伤小鼠肺组织中的表达显著高于对照组（P＜0.05）（图 1）。且差异具有统计学意义（P ＜0.05），揭示 Fn14 可能参与小鼠 ALI 的发生发展。

急性肺损伤,小鼠,存活率,肺组织

图 2-1 ATA 对 LPS 诱导的急性肺损伤小鼠存活率的影响.（n=20）*** ：与 LPS+ATA 组相比，P<0.01 阻断 Fn14 对 LPS 诱导 ALI 小鼠肺组织病理改变的影响：HE 染色结果显示，正常对照组小鼠的肺组织显示其结构完整、肺泡间隔较肺泡结构很清晰，肺泡内干净无异物。LPS 作用 12 h，可见小鼠肺组织有大性细胞浸润、肺间隔增厚同时伴有血管充血和明显出血点，显现出明显的炎应，表明小鼠 ALI 的模型复制成功。ATA 预处理组小鼠肺组织病理改变明轻（图 2-2-A），结果表明阻断 Fn14 可明显减轻 LPS 诱导的 ALI 小鼠肺组织理改变。同时我们对照评分标准对小鼠肺组织的病理改变进行炎症评分。结示 LPS 作用 12 hALI 小鼠肺组织的炎症评分明显升高，而使用 ATA 处理后肺组织炎症评分明显低于 ALI 组（图 2-2-B, P＜0.05）。以上结果显示，采

肺组织,病理改变,小鼠

23图 2-2 ATA 对 LPS 诱导 ALI 小鼠肺组织的病理改变的影响. (n=4-7)A：HE 染色；B：肺组织炎症评分**：与 Control 组相比，P<0.01；##：与 ATA+LPS 相比，P<0.01

【参考文献】