转铁蛋白修饰的去氢骆驼蓬碱磁纳米脂质体的制备及其抗脑胶质瘤的体内外作用研究

发布时间：2020-10-14 04:34

　　 目的:以Fe_3O_4@CA为造影剂,TF为靶向配体,制备TF-HM-MPS并对其体内外性质进行考察。方法:以TF为配体,通过化学偶联将其附着于脂质体膜的表面,并通过反相超声处理制备TF-HM-MPS,优化处方以筛选出最稳定TF-HM-MPS。在体外抗肿瘤细胞活性的研究中,用cck-8评价TF-HM-MPS先对人脑胶质瘤U87细胞的毒性。再通过FCM和LSCM观察细胞对TF-FITC-LPS的摄取。后使用PI/AnnexinV染色,WB和PCR等方法探究TF-HM-MPS对人脑胶质瘤U87细胞周期和凋亡的影响。在体内抗肿瘤细胞活性的研究中,先用MRI观察了TF-MPS的成像效果。再通过尾静脉注射TF-HM-LPS对荷瘤鼠进行为期21天的治疗。后通过肿瘤大小及病理学观察评价治疗效果。结果:成功制备了Fe_3O_4@CA,DLS测定粒径为(52.04±0.01)nm,TEM观察Fe_3O_4@CA大小为10 nm左右,ICP-MS定量得Fe~(3+)的含量为9.18 mmoL,且具有很强的T2效应,且所制备的TF-HM-MPS也具备很强的T2效应,可作为MRI成像的造影剂。对制备的TF-HM-MPS进行了优化,优选处方平均粒径为(171.57±3.07)nm,电位为(-24.60±2.82)mV,包封率为(68.65%±0.03)%,载药量为(5.57%±0.01)%,具有良好的稳定性。相对于HM溶液,TF-HM-MPS释放速率更为缓慢,且在PBS和血浆中药物释放度没有明显的区别。体外抗肿瘤活性实验结果表明游离HM对人脑胶质瘤U87的毒性更大,做成脂质体后毒性会减缓。采用FCM和LSCM观察TF对人脑胶质瘤U87细胞的摄取情况,结果表明TF-FITC-LPS比FITC-LPS荧光信号更强。将TF-HM-MPS作用于人脑胶质瘤U87细胞,并采用FCM、PCR和WB验证了TF-HM-MPS对人脑胶质瘤U87的凋亡作用,并对荷瘤鼠进行为期21天的治疗,结果表明TF-HM-LPS抑瘤效果明显,有潜在抗脑胶质瘤的作用。结论:实验结果表明将HM制成TF-HM-MPS后,能够显著提高HM的治疗指数,且p53介导的凋亡和周期通路可能是HM发挥抗癌机制的原理之一,所以TF-HM-MPS是一个具有潜在应用于肿瘤治疗前景的体内定位载药体系,该研究可为HM的剂型开发和其抗癌作用机理探讨奠定基础。
【学位单位】：新疆医科大学
【学位级别】：硕士
【学位年份】：2019
【中图分类】：R96;R943
【文章目录】：
摘要
Abstract
前言
研究内容与方法
    1 TF-HM-MPS的制备与表征
        1.1 仪器与试剂
        1.2 方法
        1.3 TF-HM-MPS制备结果
    2 TF-HM-MPS体外抗肿瘤活性及靶向性评价
        2.1 仪器与试剂
        2.2 方法
        2.3 TF-HM-MPS抗肿瘤活性及靶向性评价结果
    3 TF-HM-LPS体内抗肿瘤活性及靶向性研究
        3.1 仪器与试剂
        3.2 方法
        3.3 TF-HM-LPS体内抗肿瘤活性及靶向性评价结果
讨论
小结
致谢
参考文献
综述
    参考文献
攻读硕士学位期间发表的学术论文

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本文编号：2840190