癌症是全球第二大死因,目前,化疗仍然是癌症最普遍的治疗方法。在化疗药物中,紫杉烷类抗肿瘤药物在乳腺癌、肺癌、前列腺癌等实体瘤的治疗中均显示较好的疗效。其中卡巴他赛是一种化学半合成紫杉烷类小分子化合物,近几年在前列腺癌治疗方面广泛应用。然而,现在市售的卡他巴塞注射液在临床应用时,一方面由于药物在体内分布不均,如在肠道细胞中蓄积,可导致严重腹泻等胃肠道毒性,另一方面由于卡巴他赛的水溶性差,临床处方中含有增溶剂聚山梨酯80,将产生严重毒副作用,限制了卡巴他赛的应用。近年来,白蛋白纳米给药系统由于其可提高难溶药物的水溶性,且载体安全无毒、无免疫原性,可生物降解等优点受到越来越多的关注。将卡巴他赛制备成白蛋白纳米制剂可有效改善卡巴他赛的低水溶性问题,避免了聚山梨酯80使用,降低毒副作用。现有的白蛋白纳米粒制备技术如去溶剂化法,Nab~(TM)法等均存在一定的问题。这些方法操作复杂,可能影响到白蛋白的生物活性,另外有毒试剂及交联剂的使用增加了制剂的毒性。相比而言,盐析法可避免有毒试剂及交联剂使用,利用白蛋白展开与再折叠的自组装方式形成纳米制剂,保持白蛋白的生物活性且易于操作。基于上述白蛋白纳米粒与盐析法的优势,本文采用盐析法制备卡巴他赛白蛋白纳米粒(Cbz-NPs),并对其进行制备条件优化。根据临床卡巴他赛注射液溶剂配方配制了卡巴他赛注射液(Cbz-Tween),以其为对比,对Cbz-NPs进行体内外评价及抗肿瘤研究。主要研究内容及结果如下:1.卡巴他赛及人血清白蛋白基本性质研究建立了卡巴他赛体外分析方法学和人血清白蛋白体外分析方法,分别对卡巴他赛和白蛋白进行了方法学验证试验,卡巴他赛在选择浓度0.02~1.00mg/mL范围内线性关系良好,人血清白蛋白在选择浓度0.10~6.40mg/mL范围内线性关系良好,精密度分别为1.56%和0.14%,回收率平均值分别为99.15%和97.78%,稳定性的RSD分别为0.69%和0.24%,均符合药典方法学要求。2.卡巴他赛白蛋白纳米粒制备及条件优化采用响应面分析法考察制备过程中药物与白蛋白比例、白蛋白pH值、分散体系温度的影响,以包封率为指标优化Cbz-NPs的制备工艺。获得的最优制备条件为:药物与HSA比例(w/w)为0.16,pH值为7.8,分散体系温度为66℃,在该条件下,得到的Cbz-NPs包封率为52.95%。最终得到的Cbz-NPs粒度分布均一,粒径为170.2±1.9nm,载药量为5.07±0.38%。3.卡巴他赛白蛋白纳米粒体外评价对Cbz-NPs进行体外评价。Cbz-NPs冻干粉末为白色均匀粉末,复溶在生理盐水中呈澄清的淡蓝色液体。在差式扫描量热分析中,Cbz-NPs没有出现卡巴他赛化药和白蛋白的特征吸收峰,说明形成了新的物相。体外稳定性及体外释放实验中表明,其是一种稳定的且具有缓释效果的制剂。与Cbz-Tween相比,Cbz-NPs可以有效改善溶血性,适用于静脉注射。采用人肺癌细胞A549和人前列腺癌细胞PC3进行体外细胞毒性试验,Cbz-Tween的溶剂在两种细胞系中均即表现出了较强的细胞毒性,细胞存活率分别仅为81.48±5.28%和77.53±5.38%,同时,未载药纳米粒没有细胞毒性,证明了其载体的安全性。4.卡巴他赛白蛋白纳米粒体内分析方法建立采用高效液相色谱法,以地西泮作为内标,建立大鼠血浆中卡巴他赛的含量测定方法。方法学验证结果显示,该方法日间及日内精密度良好,在药物低、中、高不同浓度下的提取回收率分别为98.41±1.33%、97.23±1.86%、98.20±3.24%,基质效应为104.62±5.99%、102.36±2.99%、101.43±8.01%。此外,同样采用地西泮作为内标建立裸鼠心、肝、脾、肺、肾及肿瘤组织中卡巴他赛的含量测定方法。方法学验证结果显示,卡巴他赛的含量在0.2~10.0μg/mL浓度范围内线性关系良好(R0.99),日间及日内精密度范围为2.19%~5.43%,在药物低、中、高不同浓度下的提取回收率均大于95%,基质效应为100%左右。均符合生物样品的分析要求。5.卡巴他赛白蛋白纳米粒体内评价通过从大鼠体内药代动力学研究,荷瘤裸鼠的药物组织分布研究,荷瘤裸鼠体内抗肿瘤的初步药效学研究,组织切片观察及细胞因子检测等方面对Cbz-NPs进行体内评价。以Cbz-Tween为对比,Cbz-NPs注射组的药物半衰期(T_(1/2)(h))提高了2.12倍,药时曲线面积(AUC0-∞)提高了0.33倍,平均滞留时间(MRT0-∞)提高了0.24倍。建立裸鼠人前列腺癌PC3肿瘤模型,荷瘤裸鼠组织分布研究显示,Cbz-NPs可有效降低药物在心,脾,肾组织中的含量从而减小药物毒性,然而在肿瘤组织中,虽然Cbz-Tween在注射后0.5h药物浓度显著高于Cbz-NPs组,而随后药物浓度随时间增加而迅速下降,然而Cbz-NPs在肿瘤部位药物持续释放积累,有效提高肿瘤部位的药物含量。因此,在荷瘤裸鼠的体内抗肿瘤研究中,Cbz-NPs及Cbz-Tween均可以显著抑制肿瘤的生长,抑瘤效果接近。通过体重、脏器病理切片、细胞因子变化评价Cbz-NPs与Cbz-Tween毒性,Cbz-NPs治疗可通过高通透性和滞留效应(EPR)达到被动靶向,有效针对肿瘤组织,明显改善Cbz-Tween带来的肝脏肾脏毒性及损伤。综上,本文通过盐析法制备得到的一种具有良好粒径分布、包封率的Cbz-NPs制剂,解决了卡巴他赛低水溶性问题。同时,相比于Cbz-Tween,Cbz-NPs可以明显减小肝脏肾脏毒性,降低毒副作用,具有较好的应用效果和发展前景。
【学位单位】：吉林大学
【学位级别】：博士
【学位年份】：2018
【中图分类】：R943;R96
【部分图文】：
同微管蛋白的表达差异，微管束形成的减少、bcl-2 表达过表达等[9]。赛简介赛结构式及理化性质赛是 Sanofi-aventis 公司研发的前列腺癌的二线药物，是一小分子化合物。卡巴他赛为白色或类白色粉末。本品几卡巴他赛分子式为 C45H57NO14，分子量为 835.93。化合物对于一个继紫杉醇（Taxol or Paclitaxel）和多西紫杉醇（之后获批的紫杉醇类抗肿瘤药物品种，该品种对抗前列腺症可能进一步扩大。
30图 2.1 卡巴他赛标准曲线Fig 2.1 Calibration curve of cabazitaxel2.4.1.2 精密度试验卡巴他赛含量测定精密度的实验结果见表 2.2 卡巴他赛峰面积的 RSD 值为1.56%。所以，该检测方法测定的卡巴他赛含量的精密度较好。表 2.2 卡巴他赛含量测定的精密度实验结果Table 2.2 Precisions of cabazitaxelNO 面积 RSD（%）
图 2.2 人血清白蛋白标准曲线Fig 2.2 Calibration curve of human serum albumin2.4.2.2 精密度试验人血清白蛋白含量测定精密度的实验结果见表 2.5，人血清白蛋白峰面积的RSD 值为 0.14%。所以，该检测方法测定的人血清白蛋白含量的精密度较好。2.4.2.3 回收率试验回收率试验结果如表 2.6 显示，回收率为 97.78%，良好。2.4.2.4 稳定性试验稳定性试验结果如表 2.7 所示，本方法稳定性良好，RSD 值为 0.24%，符合含量测定要求。
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本文编号：
2854856
