顺铂长效靶向脂质体药代动力学、组织分布及急性毒性研究

发布时间：2020-11-12 23:47

　　 目的:顺铂是一种细胞毒性抗肿瘤药物,临床上作为一线化疗药物用于治疗多种实体肿瘤。但顺铂给药后会引起各种剂量限制性毒性反应,其中最主要的是肾毒性。为了提高顺铂治疗的靶向性和降低毒副作用,我们开发了一种顺铂长效靶向脂质体(ES-SSL-DDP),已经证明该脂质体能有效靶向于雌激素受体阳性表达的子宫颈癌Hela细胞及其实体瘤,并具有显著的抗肿瘤作用。现阶段,为了阐述该脂质体ES-SSL-DDP在体内的分布代谢过程和和毒性大小,本论文对该顺铂长效靶向脂质体进行药代动力学、组织分布和急性毒性研究。方法:(1)建立和验证顺铂体内分析方法。采用柱前衍生化高效液相色谱法,将顺铂与二乙基二硫代氨基甲酸钠(DDTC)发生络合反应,生成的Pt(DDTC)_2在254 nm具有很强的紫外吸收。该HPLC方法以甲醇/水(75:25)作为流动相,流速1 mL/min。(2)通过小鼠尾静脉注射6.0 mg/kg剂量的游离顺铂(DDP)、普通顺铂脂质体(L-DDP)和顺铂长效靶向脂质体(ES-SSL-DDP)后不同时间点采集血浆和组织样品,经处理后用HPLC测定血浆和组织中顺铂含量,应用DAS 2.0软件计算药代动力学参数,考察药代动力学和组织分布。(3)小鼠尾静脉注射不同剂量的DDP、L-DDP和ES-SSL-DDP后观察和记录14天内动物状态和死亡数,计算LD_(50),对第14天存活小鼠进行全血分析和计算脏器系数以及测定血尿素氮和肌酐含量,综合评价ES-SSL-DDP的急性毒性。结果:(1)顺铂保留时间约为8.22 min,无杂质干扰,分离度好(R1.5)。血浆样品和组织样品标准曲线线性关系良好,线性范围均为0.1~10.0μg/mL。最低检测限和定量限分别为0.05μg/mL和0.1μg/mL。血浆样品日内、日间精密度均小于10%,回收率在100~110%之间;组织样品精密度均小于10%,回收率在90~110%之间。样品处理后稳定性结果提示样品处理完后需在12 h内完成测定。(2)ES-SSL-DDP与游离DDP相比,C_(max)和t_(1/2)分别提高了2.4倍和26.7倍,AUC提高了25倍。ES-SSL-DDP组织分布不同于游离DDP,ES-SSL-DDP在心、脾组织分布较高,在肾组织中分布较DDP组要少。(3)小鼠尾静脉注射DDP、L-DDP、ES-SSL-DDP的LD_(50)分别为13.1、16.1和18.0 mg/kg。尾静脉注射ES-SSL-DDP的小鼠相比游离DDP和L-DDP,相同剂量下存活状态要更好,体重恢复更快。ES-SSL-DDP组小鼠血液学和脏器系数未出现明显的改变。游离DDP组BUN和Cre水平明显升高,而ES-SSL-DDP组及L-DDP组的BUN和Cre水平与正常生理盐水组相当。结论:本论文采用高效液相色谱法成功建立顺铂体内分析方法,该HPLC方法符合方法学要求,可用于血浆和组织样品中顺铂含量测定。小鼠尾静脉注射顺铂长效靶向脂质体(ES-SSL-DDP)后具有更高的血药浓度和更长的半衰期,说明ES-SSL-DDP能够减慢顺铂的代谢消除速率,延长顺铂在体内的循环时间。ES-SSL-DDP能够改变顺铂组织分布,减少顺铂在肾脏累积。ES-SSL-DDP具有更小的急性毒性,降低了顺铂对血液系统的毒性和肾毒性。
【学位单位】：吉林大学
【学位级别】：硕士
【学位年份】：2018
【中图分类】：R96
【部分图文】：

第二章 顺铂体内分析方法的建立2.3 实验结果与讨论2.3.1 专属性取空白血浆、加入顺铂标准溶液的血浆、及小鼠给药后的血浆样品按照“2.2.2”项下进行处理，按照“2.2.3”色谱条件进样测定，各样品色谱图结果见图 2.1（A-C）。顺铂保留时间为 8.224 min，血浆中其他内源性杂质不干扰顺铂含量测定，分离度好（R > 1.5）。

B空白血浆+顺铂+DDTCHPLC色谱图

图 2.1C 给药后血浆+DDTC HPLC 色谱图2.3.2 标准曲线2.3.2.1 顺铂血浆标准曲线取 180 μL 小鼠空白血浆加入 20 uL 顺铂系列标准溶液，制备成含顺铂 0.1、1.0、2.0、5.0、10.0 μg/mL 的血浆标准样品。按照“2.2.2”项下对样品进行处理。测定结果见表 2.1。以浓度（μg/mL）为横坐标，峰面积（A）为纵坐标，进行线性回归绘制标准曲线（见图 2.2），回归方程为 Y = 58620X - 2375，r2= 0.9998。结果说明顺铂血浆样品在 0.1~10.0 μg/mL 范围内线性关系良好。表 2.1 顺铂血浆标准曲线峰面积测定结果（n = 3）
【参考文献】

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1 李维凤;牛晓峰;范特;王小鹏;刘燕玲;陈天宁;;高效液相色谱法测定皮下植入顺铂的血浆及肾脏浓度[J];南方医科大学学报;2010年02期

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1 王曾;长效靶向顺铂脂质体的制备及其抗肿瘤作用研究[D];吉林大学;2016年

本文编号：2881406