肾素抑制剂类化合物对人肾近端小管上皮细胞HK-2的毒性研究

发布时间：2017-04-06 14:15

  本文关键词：肾素抑制剂类化合物对人肾近端小管上皮细胞HK-2的毒性研究，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：肾素抑制剂是治疗高血压病的一种有效手段,对该类药物/化合物进行肾细胞毒性研究,可以为研制该类药物的安全性评价提供依据。本课题以人肾近端小管上皮细胞(HK-2)作为体外细胞模型,采用多种方法评价阳性对照物阿霉素和包括阿利吉仑在内的24个肾素抑制剂类化合物对该细胞的毒性效应。采用刃天青试验检测化合物对细胞存活率/线粒体代谢活性的影响,测定细胞外乳酸脱氢酶(LDH)含量检测化合物致细胞膜损伤,测定细胞内Caspase-3和Caspase-7蛋白活性检测化合物致细胞凋亡,使用荧光显微镜观察细胞内磷脂质化。阳性对照物阿霉素作用HK-2细胞的结果表明,阿霉素对HK-2细胞有明显的毒性作用,细胞外LDH活性、细胞内Caspase蛋白活性与细胞的存活率/代谢活性负相关(R2=0.9854和R2=0.9904),胞内Caspase蛋白活性和胞外LDH活性正相关(R2=0.9988),表明阿霉素可以诱导细胞内磷脂质蓄积,引起线粒体功能障碍,进而激活细胞凋亡程序,引起细胞坏死,从而表现出对HK-2细胞的细胞毒性作用。研究表明,阿利吉仑对HK-2细胞的存活率/线粒体的代谢功能没有抑制作用,也不引起细胞的凋亡和细胞膜损伤,但可以诱导HK-2细胞发生轻微的磷脂质化；23个肾素抑制剂类化合物中,化合物R397在高剂量下可以致HK-2细胞形态改变,发生严重磷脂质化,对HK-2细胞的存活率/代谢活性有显著抑制作用,但不引起细胞凋亡或细胞膜损伤。高剂量的R407可以抑制HK-2细胞的存活,引起细胞膜结构损伤,致细胞死亡；R404和R438可以抑制细胞线粒体代谢活性；R421、R581和R585可以诱导HK-2细胞发生凋亡并引起细胞膜结构损伤；R423、R425、R484和R522能引起细胞膜结构损伤,但不影响细胞线粒体功能。高剂量的R423、R425和R522能诱导HK-2细胞发生严重磷脂质化。其余化合物12个肾素抑制剂类化合物在HK-2细胞上,未显示出对细胞存活和对细胞线粒体代谢功能的抑制,也不引起细胞的凋亡和细胞膜结构破坏,但在高剂量下都可以诱导HK-2细胞发生和同剂量阿利吉仑相近或稍强于阿利吉仑的磷脂质化。
【关键词】：肾素抑制剂 HK-2细胞 细胞毒性 磷脂质
【学位授予单位】：华东理工大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R96
【目录】：

• 摘要5-6
• Abstract6-8
• 第1章 前言8-21
• 1.1 本课题的研究背景8-9
• 1.2 RAAS的主要机制和相关抗高血压药物9-16
• 1.2.1 RAAS的主要机制9-10
• 1.2.2 作用于RAAS的抗高血压药物10-16
• 1.3 体外模型在新药安全性评价中的重要性16-18
• 1.4 体外肾毒性评价方法18-20
• 1.5 本课题研究的目的和意义20-21
• 第2章 肾素抑制剂类化合物对人肾HK-2细胞的毒性研究21-50
• 2.1 引言21-22
• 2.2 实验方法22-26
• 2.2.1 细胞、试剂及仪器22
• 2.2.2 肾素抑制剂类化合物药效检测22-23
• 2.2.3 药物处理细胞23
• 2.2.4 细胞活力检测23
• 2.2.5 乳酸脱氢酶(LDH)含量检测23-24
• 2.2.6 Caspase-3和Caspase-7蛋白活性检测24
• 2.2.7 细胞磷脂质化检测24-25
• 2.2.8 统计方法25-26
• 2.3 结果与讨论26-48
• 2.3.1 阳性对照物阿霉素对HK-2细胞的毒性实验26-30
• 2.3.2 阿霉素诱导HK-2细胞毒性机制的探讨30-32
• 2.3.3 肾素抑制剂类化合物体外药效的实验32-33
• 2.3.4 阿利吉仑对HK-2细胞的毒性实验33-35
• 2.3.5 肾素抑制剂类化合物对HK-2细胞的毒性实验35-48
• 2.4 结论48-50
• 参考文献50-56
• 致谢56

【参考文献】

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本文编号：289010