378种激酶抑制剂抗囊型包虫病的筛选
发布时间：2020-12-05 10:39
目的:（1）通过体外抗细粒棘球绦虫原头蚴筛选,推测可用于抗包虫病筛选的靶点。（2）体外筛选得到的药物,进行动物实验找到一个或几个对感染E.g小鼠有疗效的药物。（3）体外筛选结合动物体内药效实验,建立可行的抗包虫病筛选平台。方法:（1）378种激酶抑制剂终浓度为5 μM杀伤细粒棘球绦虫原头蚴,亚甲基蓝染色后筛选原头蚴死亡率达到95%药物。其次将药物浓度降低到1μM,亚甲基蓝染色后统计原头蚴死亡率,选择原头蚴死亡率较高的药物。最后通过系列浓度杀伤原头蚴实验,分析药物杀伤原头蚴的半数致死浓度（LC50）,选择体外杀伤细粒棘球绦虫原头蚴最佳的药物。（2）建立BABL/c小鼠继发感染细粒棘球蚴模型,剖解感染6个月小鼠,选择直径范围在5～10 mm包囊,进行药物体外杀伤包囊实验。（3）选择体外杀伤原头蚴及包囊最佳的药物,通过灌胃给药方式评价感染细粒棘球小鼠体内药效实验,观察小鼠血常规、肝脏肾脏功能及电解质指标变化,脏器称重分析脏器变化,病理检查分析小鼠肝脏、肾脏及脾脏结构变化,评价药物安全性指标。评价包囊湿重、包囊死亡率及包囊透射电镜分析超微结构变化,评价药物药效指标。结果:本研究所选用的小分子激...
【文章来源】：新疆医科大学新疆维吾尔自治区
【文章页数】：91 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
图１－２药物作用原头蚴形态变化??
吸盘、顶突等结构慢慢退化，钙颗粒逐渐减少。原头蚴培养２个月后发??育成囊，囊呈圆形或者椭圆形，头节不可逆内陷，头部吸盘等结构完全退化，囊外??发育出一层透明胶质状外囊壁，见图１－４。??＃｜：?：??ｄＡｖ、：?Ｂ??ｉＡ?Ｕｅｌ?‘?ｆ?Ｂ?－Ｉ??图１－４体外培养微囊的形态??Ｆｉｇ．１－４?Ｍｏｒｐｈｏｌｏｇｙ?ｏｆＥ．?ｇｒａｎｕｌｏｓｕｓ?ｃｙｓｔｓ?ｃｕｌｔｕｒｅｄ?ｉｎ?ｖｉｔｒｏ?ｆｏｒ?２?ｍｏｎｔｈｓ??注：Ａ培养１５天微囊；Ｂ培养２个月微囊??Ｎｏｔｅ：?Ｃｙｓｔｓ?ｃｕｌｔｕｒｅｄ?ｆｏｒ?１５?ｄａｙｓ；Ｂ?Ｃｙｓｔｓ?ｃｕｌｔｕｒｅｄ?ｆｏｒ?２?ｍｏｎｔｈｓ??将发育出角质层囊壁的囊注射到小鼠体内，感染ＢＡＬＢ／ｃ小鼠。解剖感染３个??月小鼠，发现小鼠体内包囊多聚集于腹部脂肪，还有少许包囊镶嵌于小鼠肝脏（图１－５，??Ｂ），经统计发现９０％以上小鼠肝脏附近均发现包囊，说明包囊具有肝脏倾向性。感??染６个月后，小鼠腹部明显隆起，打开腹腔发现包囊多为游离单个包囊（图１－５，?Ｂ）。??＇￡?：?％１：??系：暴??图１－５小鼠细粒棘球蝴模型的观察??Ｆｉｇ．１－５?Ｍｏｒｐｈｏｌｏｇｙ?ｏｆ?Ｅ．ｇｒａｎｕｌｏｓｕｓ?ｃｙｓｔｓ?ｉｎ?ｍｏｕｓｅ?ｍｏｄｅｌ??注：Ａ感染细粒棘球蚴３个月小鼠；Ｂ感染细粒棘球蚴６个月小鼠??Ｎｏｔｅ：?Ｅ．ｇｒａｎｕｌｏｓｕｓ?ｃｙｓｔｓ?ｉｎ?ａ?ｍｏｕｓｅ?ｆｏｒ?３?ｍｏｎｔｈｓ?（ａ）?ａｎｄ?ｆｏｒ?６?ｍｏｎｔｈｓ（Ｂ）．??取感染３个月和６个月小鼠的血清
吸盘、顶突等结构慢慢退化，钙颗粒逐渐减少。原头蚴培养２个月后发??育成囊，囊呈圆形或者椭圆形，头节不可逆内陷，头部吸盘等结构完全退化，囊外??发育出一层透明胶质状外囊壁，见图１－４。??＃｜：?：??ｄＡｖ、：?Ｂ??ｉＡ?Ｕｅｌ?‘?ｆ?Ｂ?－Ｉ??图１－４体外培养微囊的形态??Ｆｉｇ．１－４?Ｍｏｒｐｈｏｌｏｇｙ?ｏｆＥ．?ｇｒａｎｕｌｏｓｕｓ?ｃｙｓｔｓ?ｃｕｌｔｕｒｅｄ?ｉｎ?ｖｉｔｒｏ?ｆｏｒ?２?ｍｏｎｔｈｓ??注：Ａ培养１５天微囊；Ｂ培养２个月微囊??Ｎｏｔｅ：?Ｃｙｓｔｓ?ｃｕｌｔｕｒｅｄ?ｆｏｒ?１５?ｄａｙｓ；Ｂ?Ｃｙｓｔｓ?ｃｕｌｔｕｒｅｄ?ｆｏｒ?２?ｍｏｎｔｈｓ??将发育出角质层囊壁的囊注射到小鼠体内，感染ＢＡＬＢ／ｃ小鼠。解剖感染３个??月小鼠，发现小鼠体内包囊多聚集于腹部脂肪，还有少许包囊镶嵌于小鼠肝脏（图１－５，??Ｂ），经统计发现９０％以上小鼠肝脏附近均发现包囊，说明包囊具有肝脏倾向性。感??染６个月后，小鼠腹部明显隆起，打开腹腔发现包囊多为游离单个包囊（图１－５，?Ｂ）。??＇￡?：?％１：??系：暴??图１－５小鼠细粒棘球蝴模型的观察??Ｆｉｇ．１－５?Ｍｏｒｐｈｏｌｏｇｙ?ｏｆ?Ｅ．ｇｒａｎｕｌｏｓｕｓ?ｃｙｓｔｓ?ｉｎ?ｍｏｕｓｅ?ｍｏｄｅｌ??注：Ａ感染细粒棘球蚴３个月小鼠；Ｂ感染细粒棘球蚴６个月小鼠??Ｎｏｔｅ：?Ｅ．ｇｒａｎｕｌｏｓｕｓ?ｃｙｓｔｓ?ｉｎ?ａ?ｍｏｕｓｅ?ｆｏｒ?３?ｍｏｎｔｈｓ?（ａ）?ａｎｄ?ｆｏｒ?６?ｍｏｎｔｈｓ（Ｂ）．??取感染３个月和６个月小鼠的血清
【参考文献】：
期刊论文
[1]犬包虫病防治专用驱虫药——吡喹酮咀嚼片的研制与应用[J]. 胡燕,游锡火,吕剑恒. 中国动物保健. 2017(07)
[2]微囊法棘球蚴继发感染小鼠动物模型的建立[J]. 王慧,李军,郭宝平,温浩,张文宝. 中国人兽共患病学报. 2016(09)
[3]儿童棘球蚴病及阿苯达唑治疗对肝功能的影响[J]. 韩帅,王立英,伍卫平,蔡辉霞,马霄,王虎,曾祥嫚,朱曜宇,牛彦麟,白雪飞. 中国病原生物学杂志. 2016(05)
[4]包虫病病原在我国的流行现状及成因分析[J]. 刘平,李金花,李印,康京丽,戴琪,赵娜,孙向东. 中国动物检疫. 2016(01)
[5]吡喹酮注射液的含量测定及稳定性研究[J]. 杨海峰,李勇军,金礼琴,赵杉杉,孙爱荣,乔新月. 中国畜牧兽医. 2015(11)
[6]细粒棘球蚴原头蚴包囊和原头蚴成虫抑制差减杂交文库中差异表达基因的筛选及分析[J]. 赵莉,石保新,李军,张壮志,马正海,张旭,薛晶,金映红,张文宝. 畜牧兽医学报. 2015(07)
[7]IGF-ⅠR抑制剂OSI-906体外抗细粒棘球绦虫原头蚴作用的研究[J]. 李娟,赵军,肖云峰,刘辉,吕国栋,王建华. 中国病原生物学杂志. 2014(06)
[8]阿苯达唑乳剂治疗囊型包虫病116例临床疗效观察[J]. 古丽拜尔·卡哈尔,阿地力·买买提,多力坤·买买提. 新疆医学. 2012(05)
[9]Hepatic echinococcosis:Clinical and therapeutic aspects[J]. Giuseppe Nunnari,Marilia R Pinzone,Salvatore Gruttadauria,Benedetto M Celesia,Giordano Madeddu,Giulia Malaguarnera,Piero Pavone,Alessandro Cappellani,Bruno Cacopardo. World Journal of Gastroenterology. 2012(13)
[10]棘球蚴体外培养技术的应用[J]. 倪兴维,贾万忠,者永辉,金科. 中国寄生虫学与寄生虫病杂志. 2011(04)
本文编号：2899322
【文章来源】：新疆医科大学新疆维吾尔自治区
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【学位级别】：硕士
【部分图文】：
图１－２药物作用原头蚴形态变化??
吸盘、顶突等结构慢慢退化，钙颗粒逐渐减少。原头蚴培养２个月后发??育成囊，囊呈圆形或者椭圆形，头节不可逆内陷，头部吸盘等结构完全退化，囊外??发育出一层透明胶质状外囊壁，见图１－４。??＃｜：?：??ｄＡｖ、：?Ｂ??ｉＡ?Ｕｅｌ?‘?ｆ?Ｂ?－Ｉ??图１－４体外培养微囊的形态??Ｆｉｇ．１－４?Ｍｏｒｐｈｏｌｏｇｙ?ｏｆＥ．?ｇｒａｎｕｌｏｓｕｓ?ｃｙｓｔｓ?ｃｕｌｔｕｒｅｄ?ｉｎ?ｖｉｔｒｏ?ｆｏｒ?２?ｍｏｎｔｈｓ??注：Ａ培养１５天微囊；Ｂ培养２个月微囊??Ｎｏｔｅ：?Ｃｙｓｔｓ?ｃｕｌｔｕｒｅｄ?ｆｏｒ?１５?ｄａｙｓ；Ｂ?Ｃｙｓｔｓ?ｃｕｌｔｕｒｅｄ?ｆｏｒ?２?ｍｏｎｔｈｓ??将发育出角质层囊壁的囊注射到小鼠体内，感染ＢＡＬＢ／ｃ小鼠。解剖感染３个??月小鼠，发现小鼠体内包囊多聚集于腹部脂肪，还有少许包囊镶嵌于小鼠肝脏（图１－５，??Ｂ），经统计发现９０％以上小鼠肝脏附近均发现包囊，说明包囊具有肝脏倾向性。感??染６个月后，小鼠腹部明显隆起，打开腹腔发现包囊多为游离单个包囊（图１－５，?Ｂ）。??＇￡?：?％１：??系：暴??图１－５小鼠细粒棘球蝴模型的观察??Ｆｉｇ．１－５?Ｍｏｒｐｈｏｌｏｇｙ?ｏｆ?Ｅ．ｇｒａｎｕｌｏｓｕｓ?ｃｙｓｔｓ?ｉｎ?ｍｏｕｓｅ?ｍｏｄｅｌ??注：Ａ感染细粒棘球蚴３个月小鼠；Ｂ感染细粒棘球蚴６个月小鼠??Ｎｏｔｅ：?Ｅ．ｇｒａｎｕｌｏｓｕｓ?ｃｙｓｔｓ?ｉｎ?ａ?ｍｏｕｓｅ?ｆｏｒ?３?ｍｏｎｔｈｓ?（ａ）?ａｎｄ?ｆｏｒ?６?ｍｏｎｔｈｓ（Ｂ）．??取感染３个月和６个月小鼠的血清
吸盘、顶突等结构慢慢退化，钙颗粒逐渐减少。原头蚴培养２个月后发??育成囊，囊呈圆形或者椭圆形，头节不可逆内陷，头部吸盘等结构完全退化，囊外??发育出一层透明胶质状外囊壁，见图１－４。??＃｜：?：??ｄＡｖ、：?Ｂ??ｉＡ?Ｕｅｌ?‘?ｆ?Ｂ?－Ｉ??图１－４体外培养微囊的形态??Ｆｉｇ．１－４?Ｍｏｒｐｈｏｌｏｇｙ?ｏｆＥ．?ｇｒａｎｕｌｏｓｕｓ?ｃｙｓｔｓ?ｃｕｌｔｕｒｅｄ?ｉｎ?ｖｉｔｒｏ?ｆｏｒ?２?ｍｏｎｔｈｓ??注：Ａ培养１５天微囊；Ｂ培养２个月微囊??Ｎｏｔｅ：?Ｃｙｓｔｓ?ｃｕｌｔｕｒｅｄ?ｆｏｒ?１５?ｄａｙｓ；Ｂ?Ｃｙｓｔｓ?ｃｕｌｔｕｒｅｄ?ｆｏｒ?２?ｍｏｎｔｈｓ??将发育出角质层囊壁的囊注射到小鼠体内，感染ＢＡＬＢ／ｃ小鼠。解剖感染３个??月小鼠，发现小鼠体内包囊多聚集于腹部脂肪，还有少许包囊镶嵌于小鼠肝脏（图１－５，??Ｂ），经统计发现９０％以上小鼠肝脏附近均发现包囊，说明包囊具有肝脏倾向性。感??染６个月后，小鼠腹部明显隆起，打开腹腔发现包囊多为游离单个包囊（图１－５，?Ｂ）。??＇￡?：?％１：??系：暴??图１－５小鼠细粒棘球蝴模型的观察??Ｆｉｇ．１－５?Ｍｏｒｐｈｏｌｏｇｙ?ｏｆ?Ｅ．ｇｒａｎｕｌｏｓｕｓ?ｃｙｓｔｓ?ｉｎ?ｍｏｕｓｅ?ｍｏｄｅｌ??注：Ａ感染细粒棘球蚴３个月小鼠；Ｂ感染细粒棘球蚴６个月小鼠??Ｎｏｔｅ：?Ｅ．ｇｒａｎｕｌｏｓｕｓ?ｃｙｓｔｓ?ｉｎ?ａ?ｍｏｕｓｅ?ｆｏｒ?３?ｍｏｎｔｈｓ?（ａ）?ａｎｄ?ｆｏｒ?６?ｍｏｎｔｈｓ（Ｂ）．??取感染３个月和６个月小鼠的血清
【参考文献】：
期刊论文
[1]犬包虫病防治专用驱虫药——吡喹酮咀嚼片的研制与应用[J]. 胡燕,游锡火,吕剑恒. 中国动物保健. 2017(07)
[2]微囊法棘球蚴继发感染小鼠动物模型的建立[J]. 王慧,李军,郭宝平,温浩,张文宝. 中国人兽共患病学报. 2016(09)
[3]儿童棘球蚴病及阿苯达唑治疗对肝功能的影响[J]. 韩帅,王立英,伍卫平,蔡辉霞,马霄,王虎,曾祥嫚,朱曜宇,牛彦麟,白雪飞. 中国病原生物学杂志. 2016(05)
[4]包虫病病原在我国的流行现状及成因分析[J]. 刘平,李金花,李印,康京丽,戴琪,赵娜,孙向东. 中国动物检疫. 2016(01)
[5]吡喹酮注射液的含量测定及稳定性研究[J]. 杨海峰,李勇军,金礼琴,赵杉杉,孙爱荣,乔新月. 中国畜牧兽医. 2015(11)
[6]细粒棘球蚴原头蚴包囊和原头蚴成虫抑制差减杂交文库中差异表达基因的筛选及分析[J]. 赵莉,石保新,李军,张壮志,马正海,张旭,薛晶,金映红,张文宝. 畜牧兽医学报. 2015(07)
[7]IGF-ⅠR抑制剂OSI-906体外抗细粒棘球绦虫原头蚴作用的研究[J]. 李娟,赵军,肖云峰,刘辉,吕国栋,王建华. 中国病原生物学杂志. 2014(06)
[8]阿苯达唑乳剂治疗囊型包虫病116例临床疗效观察[J]. 古丽拜尔·卡哈尔,阿地力·买买提,多力坤·买买提. 新疆医学. 2012(05)
[9]Hepatic echinococcosis:Clinical and therapeutic aspects[J]. Giuseppe Nunnari,Marilia R Pinzone,Salvatore Gruttadauria,Benedetto M Celesia,Giordano Madeddu,Giulia Malaguarnera,Piero Pavone,Alessandro Cappellani,Bruno Cacopardo. World Journal of Gastroenterology. 2012(13)
[10]棘球蚴体外培养技术的应用[J]. 倪兴维,贾万忠,者永辉,金科. 中国寄生虫学与寄生虫病杂志. 2011(04)
本文编号：2899322
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