报告基因法检测重组人sgp130-Fc融合蛋白生物学活性

发布时间：2020-12-06 19:59

　　重组人可溶性gp130-Fc融合蛋白（sgp130-Fc）是一种用于治疗溃疡性结肠炎的选择性IL-6反式信号传导抑制剂和抗炎生物药。目前其生物学活性测定方法是BAF3/gp130细胞增殖抑制法,此方法耗时较长、操作复杂,并且BAF3/gp130细胞对IL-6/sIL-6Rα复合物只是部分依赖性增殖（细胞培养密度过大会丧失这种依赖性）,细胞培养的不确定性导致了活性检测的不稳定性,容易引起实验结果变异度大、重复性差。而基于药物作用机制的报告基因法（reporter gene assay,RGA）由于其简便性、特异性、高灵敏度和低变异度,在药物生物学活性检测领域得到越来越广泛的应用。本课题的目的是建立一种快速测定sgp130-Fc生物学活性的报告基因测活方法。根据sgp130-Fc的作用机制（特异性抑制IL-6反式信号通路）,选择包含JAK/STAT3特异的DNA反应元件SIE、萤光素酶基因和潮霉素筛选标记基因的质粒载体,转染CHO-K1细胞并筛选对sgp130-Fc反应性好、可稳定传代的单克隆细胞株,建立报告基因测活方法并进行条件优化和方法学验证。本研究成功构建了报告基因细胞株CHO/SI... 

【文章来源】：中国食品药品检定研究院北京市

【文章页数】：83 页

【学位级别】：硕士

【部分图文】：

gp130和IL-6R的分子结构

中国食品药品检定研究院 IL-6R 的分子结构。 PM：细胞质膜。Ig：IgG 样结构域。结合结构域。FNIII：III 纤维黏连素样结构域。[12] Molecular structure of gp130 and IL-6R PM: Plasma membranBM: Cytokine-binding module. FN III: Fibronectin-type-III-like

图 3. Sgp130-Fc 的分子结构[13]。Figure 3. Sgp130-Fc molecular structure[13].融合蛋白属于重组蛋白类药物，由于其分子异质性，为关键质量属性（Critical Quality Attribute，CQA）新药开发和药物质量控制具有重要意义。目前该药物AF3/gp130 细胞增殖抑制法，即通过药物对 IL-6/sI BAF3/gp130 增殖的抑制作用，评价药物的生物学活操作复杂，并且由于 BAF3/gp130 细胞对 IL-6/sIL-殖（细胞培养密度过大会丧失这种依赖性），只能维定期（4 至 6 周）通过平行培养不含 IL-6/sIL-6Rα复IL-6Rα复合物的生长依赖性，一旦丧失了这种依赖性

【参考文献】：
期刊论文
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硕士论文
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本文编号：2901947