西格列汀对高糖高脂环境下H9c2心肌细胞自噬及凋亡的影响

发布时间：2020-12-06 15:59

　　目的:通过高糖高脂离体培养大鼠H9c2心肌细胞,模拟心肌细胞的糖尿病环境,再给予西格列汀处理,观察高糖高脂造模组与正常对照组及造模后药物处理组细胞的自噬和凋亡表达情况。方法:实验分为三部分:（1）大鼠H9c2心肌细胞在体外培养,随机分为正常对照组（Con组）、高糖高脂组（HP组）和高糖高脂+不同浓度西格列汀组（0.1、1、5、10、20和50μmol·L-1）（HP+Sit组）,采用CCK-8检测细胞活力,选择最佳的西格列汀作用浓度;（2）将体外培养的大鼠H9c2心肌细胞随机分为正常对照组（Con组）、高糖高脂组（HP组）、西格列汀组（Sit组）和高糖高脂+西格列汀组（HP+Sit组）,运用蛋白免疫印迹法（Western Blot,WB）检测自噬相关蛋白LC3和Beclin-1的表达情况,采用单丹磺酰戊二胺（Monodansylcadaverine,MDC）荧光染色法检测细胞内自噬体的形成,通过以上实验观察西格列汀对高糖高脂条件下H9c2细胞自噬的影响;（3）体外培养的大鼠H9c2心肌细胞随机分为正常对照组（Con组）、高糖高脂组（HP组）、西格列汀组（Sit组）和高糖高脂+西格列汀组... 

【文章来源】：湖北科技学院湖北省

【文章页数】：42 页

【学位级别】：硕士

【部分图文】：

高糖高脂单独处理及高糖高脂联合不同浓度西格列汀处理H9c2细胞(x±，n=3）

图 2 高糖高脂单独处理及高糖高脂联合西格列汀处理 H9c2 细胞(x ± ，n =3）。 A. 分析高糖高脂单独处理及高糖高脂联合西格列汀处理心肌 H9c2 细胞 24h，对胞内 LC3 积累的影响，*与 Con 组相比，P <0.05，#与 HP 组相比，P <0.05；B. 分析高糖高脂处理及高糖高脂联合西格列汀处理心肌 H9c2 细胞 24h，对胞内 Beclin-1积累的影响，*与 Con 组相比，P <0.05，#与 HP 组相比，P <0.05。2.2 西格列汀对高糖高脂环境下心肌细胞内自噬体形成的影响MDC 标记的自噬空泡表现为分布在细胞质或核周空间中的不同点状结构。MDC荧光染色结果显示：与 Con 相比，HP 组 MDC 阳性细胞所占比例降低，给予 Sit 后有明显增多，单独给予 Sit 组表达与 Con 组无明显差异。见图 3。由 Western blot 和 MDC荧光染色检测结果可见，HP 抑制 H9c2 细胞的自噬表达，Sit 则可以逆转 HP 对 H9c2细胞的自噬抑制。

糖高脂单独处理及高糖高脂联合西格列汀处理 H9c2 细析高糖高脂单独处理及高糖高脂联合西格列汀处理心肌 H积累的影响，*与 Con 组相比，P <0.05，#与 HP 组相比，P理及高糖高脂联合西格列汀处理心肌 H9c2 细胞 24h，对*与 Con 组相比，P <0.05，#与 HP 组相比，P <0.05。汀对高糖高脂环境下心肌细胞内自噬体形成的影记的自噬空泡表现为分布在细胞质或核周空间中的不同点显示：与 Con 相比，HP 组 MDC 阳性细胞所占比例降低，独给予 Sit 组表达与 Con 组无明显差异。见图 3。由 Weste结果可见，HP 抑制 H9c2 细胞的自噬表达，Sit 则可以逆制。

【参考文献】：
期刊论文
[1]糖尿病心肌病发病机制的研究进展[J]. 黄娅茜,王宪,孔炜.  生理科学进展. 2010(01)



本文编号：2901649