LC-MS/MS法测定Beagle犬血浆中美金刚的质量浓度

发布时间：2020-12-09 05:35

　　目的建立LC-MS/MS法测定Beagle犬血浆中美金刚的质量浓度,并将此方法应用于盐酸美金刚片在Beagle犬体内的药动学研究。方法采用蛋白沉淀法处理血浆样品,以金刚烷胺为内标物质（IS）,采用Grace Altima HP C₁₈（50 mm×2.1 mm,5μm）色谱柱,流动相为体积分数0.1%甲酸水溶液-体积分数0.1%甲酸乙腈溶液,梯度洗脱,流速为0.35 m L·min^-1。离子源为电喷雾电离（ESI）源,采用正离子化方式测定,采用多反应监测（multiple reaction monitoring,MRM）模式检测,用于定量分析的离子反应为m/z 179.8→m/z 162.8（美金刚）,m/z 152.6→m/z 135.7（金刚烷胺,内标物质）。4只健康雄性Beagle犬单次经口给予盐酸美金刚片25 mg,用Win Nonlin 6.1软件以非房室模型计算药动学参数。结果血浆中美金刚线性范围为0.001⁰.2 mg·L^-1,定量下限为1μg·L^-1,日内和日间... 

【文章来源】：沈阳药科大学学报. 2016年02期 第144-150页 北大核心

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【部分图文】：

美金刚(A)和金刚烷胺(B)的产物离子扫描图

A—Blankplasma;B—BlankplasmaspikedwithmemantineandIS;C—Aplasmasampleof2hafteranoralofmemantine;Ⅰ—Memantine;Ⅱ—AmantadineFig．3ＲepresentativeMＲMchromatogramsofmemantineandISinBeagledogplasma．图3血浆中美金刚和金刚烷胺的典型MＲM色谱图2.5.5提取回收率试验及基质效应取Beagle犬空白血浆50μL，置于1.5mLEP管中，分别依次加入美金刚低、中和高3个质量浓度质量控制溶液5μL，配制成相当于质量浓度为0.3×10－2、0.08和0.16mg·L－1的血浆质量控制样品(QC)，除不加乙腈-水(体积比6∶4)外，按“2.2”条方法操作，按“2.3”条测定条件进行LC-MS/MS分析，获得相应峰面积值A;另取Beagle犬空白血浆50μL，按“2.2”条方法操作，离心后获得上清液，分别依次加入美金刚低、中和高3个质量浓度控制溶液5μL，按“2.3”条测定条件进行LC-MS/MS分析，获得相应峰面积值B;另取乙腈-水(体积比6∶4)50μL，分别依次加入美金刚低、中和高3个质量浓度控制溶液5μL，按“2.3”条测定条件进行LC-MS/MS分析，获得相应峰面积C，每一个质量浓度进行6样本分析。以A/B×100%(%)计算提取回收率，B/C×100%(%)计算基质效应。结果表明，美金刚低、中、高3个质量浓度的提取回收率分别为(96.8±10.3)%、(94.9±3.9)%和(95.4±1.0)%，内标提取回收第2期刘佳等:LC-MS/MS法测定Beagle犬血浆中美金刚的质量浓度147

烷胺，IS)。美金刚和金刚烷胺的产物离子扫描图见图2。Fig．2Productionmassspectraofmemantine(A)andamantadine(IS)(B)图2美金刚(A)和金刚烷胺(B)的产物离子扫描图2.5分析方法确证2.5.1专属性试验分别取6只Beagle犬空白血浆各50μL，置于1.5mLEP管中，除将内标溶液用乙腈-水(体积比6∶4)代替外，其余按“2.2”条方法操作，按“2.3”条测定条件进行LC-MS/MS分析，获得空白血浆样品的色谱图，如图3A。分别取6只Beagle犬空白血浆各50μL，置于1.5mLEP管中，加入一定质量浓度的美金刚对照溶液5μL，除不加乙腈-水(体积比6∶4)外，其余按“2.2”条方法操作，按“2.3”条测定条件进行LC-MS/MS分析，获得相应的色谱图，如图3B。美金刚的保留时间为1.95min，内标保留时间为1.51min。取Beagle犬径口给予盐酸美金刚片后2h的血浆样品50μL，按“2.2”条方法操作，按“2.3”条测定条件进行LC-MS/MS分析，获得相应的色谱图，如图3C。结果表明，空白血浆中内源性物质不干扰待测物美金刚与内标物的测定。2.5.2残留效应试验按“2.2”条方法操作制备空白血浆样品和定量上限血浆样品，按空白血浆样品、定量上限血浆样品和空白血浆样品顺序分别进行单样本分析，交替进样6次。残留的美金刚和金刚烷胺(IS)响应值不超过定量下限响应值的20%，结果表明残留效应对测定的影响可以忽略不计。2.5.3标准曲线的绘制和定量下限的确定取Beagle犬空白血浆50μL，置于1.5mLEP管中，依次加入质量浓度0.01、0.02、0.1、0.5、1.0和2.0mg·L－1美金刚标准工作溶液5μL，配制成相当于质量浓度分别为0.1×10－2、0.2×10－2、0.01、0.05、0.1和0.2mg·L－1的血浆样品，除不加乙腈-水(体积比6∶4)外，其余按“2.2”条方法操作，按“2.3”?


本文编号：2906363