高效液相色谱法测定黑色素瘤小鼠尿液中达卡巴嗪
发布时间:2020-12-16 23:19
达卡巴嗪是治疗恶性黑色素瘤的一线化疗药物。它在体内主要经肝脏代谢,同时部分药物仍以原药形式经尿液排出。这就意味着可以通过监测尿液中达卡巴嗪的含量评估其在人体内的利用率和转化率,进而对其治疗效果进行评价。针对达卡巴嗪,人们发展了多种分析方法,但多基于高效液相色谱-质谱平台。然而达卡巴嗪为强极性弱碱性化合物,采用常规反相色谱法分析时会出现出峰时间过早、峰形拖尾的现象,导致定量不准确。基于此,该文建立了一种测定尿液中达卡巴嗪含量的高效液相色谱方法以克服上述问题。小鼠尿液经丙酮沉淀法去除蛋白后,采用Shimadzu-GL ODS柱(150 mm×4.6 mm, 5μm)分离,色谱条件如下:流动相为甲醇/乙腈(1∶1, v/v)-0.01 mol/L磷酸二氢钠溶液(pH=6.5)(20∶80, v/v),流速1 mL/min,检测波长280 nm,柱温35℃,洗脱时间15 min。在该色谱条件下,达卡巴嗪保留时间为5.3 min且峰形良好。其在0.25~1 000μg/mL范围内线性关系良好(r2=0.999)。基于信噪比(S/N)=3和S/N=10,计算出检出限和定量限分...
【文章来源】:色谱. 2020年11期 北大核心
【文章页数】:6 页
【部分图文】:
达卡巴嗪的结构式
健康C57BL/6雌性小鼠,体重18±2 g,购于成都达硕实验动物有限公司。自由进食饮水,适应性饲养5天后采用皮下注射法将B16-F10细胞(1×106个/mL)接种于小鼠右下腋,每只100 μL,正常组注射等量生理盐水。每日观察皮毛、食欲、活动及成瘤情况。造模成功后,随机分为正常组(未接种肿瘤的正常黑色素瘤小鼠)、模型组(接种肿瘤但未进行给药的黑色素瘤小鼠)、BA组(22.5 mg/kg;灌胃给药[i.g.];每日一次), DTIC组(70 mg/kg;腹腔注射[i.p.];每4日一次)、BA+DTIC组(BA及DTIC给药方式同上),每组8只,正常组及模型组灌胃等量的生理盐水,每日1次。每3天测量一次肿瘤体积,给药结束后,小鼠脱颈处死(实验流程见图2)。1.5 尿液的收集及处理
从图1可以发现,DTIC含有多个杂原子,极性较大,同时又含有多个氨基,说明其具有一定碱性。选择常规流动相体系时,DTIC在C18柱上的保留较弱,同时会出现峰形拖尾的情况。为改善峰形,增加保留时间,提高定量准确性,考察了DTIC在不同pH值的缓冲盐体系(磷酸盐、醋酸铵等)、乙腈、甲醇及乙腈/甲醇不同体积比的混合液等流动相体系中的保留行为,以保留时间和分离度为指标,确定最优色谱条件(见1.3节)。在此条件下正常组小鼠尿液样品和正常组小鼠加标尿液样品的色谱图见图3。从图3中可以看出,达卡巴嗪保留时间在5.3 min,尿液中的内源性物质对达卡巴嗪干扰少,峰形良好。表 1 DTIC在C57BL/6小鼠尿液中3个加标水平下的 回收率(n=5)Table 1 Recovery of DTIC spiked in a urine sample of C57BL/6 mouse (n=5) Added/(μg/mL) Found (Mean±SD)/(μg/mL) Recovery/% RSD/% 50.0 49.5± 1.6 98.9 3.2 375 381± 5 102 1.3 500 485± 6 99.1 1.2 表 2 DTIC在C57BL/6小鼠尿液中的日内及日间精密度(n=6) Table 2 Inter-day and intra-day precision of DTIC in C57BL/6 mouse urine (n=6) Test Added/(μg/mL) Found/(μg/mL) RSD/% Inter-day 50.0 49.2± 1.7 3.4 250 258± 10 3.7 500 500± 5 0.9 Intra-day 50.0 47.5± 2.0 4.3 250 254± 4 1.5 500 495± 5 1.1
本文编号:2920965
【文章来源】:色谱. 2020年11期 北大核心
【文章页数】:6 页
【部分图文】:
达卡巴嗪的结构式
健康C57BL/6雌性小鼠,体重18±2 g,购于成都达硕实验动物有限公司。自由进食饮水,适应性饲养5天后采用皮下注射法将B16-F10细胞(1×106个/mL)接种于小鼠右下腋,每只100 μL,正常组注射等量生理盐水。每日观察皮毛、食欲、活动及成瘤情况。造模成功后,随机分为正常组(未接种肿瘤的正常黑色素瘤小鼠)、模型组(接种肿瘤但未进行给药的黑色素瘤小鼠)、BA组(22.5 mg/kg;灌胃给药[i.g.];每日一次), DTIC组(70 mg/kg;腹腔注射[i.p.];每4日一次)、BA+DTIC组(BA及DTIC给药方式同上),每组8只,正常组及模型组灌胃等量的生理盐水,每日1次。每3天测量一次肿瘤体积,给药结束后,小鼠脱颈处死(实验流程见图2)。1.5 尿液的收集及处理
从图1可以发现,DTIC含有多个杂原子,极性较大,同时又含有多个氨基,说明其具有一定碱性。选择常规流动相体系时,DTIC在C18柱上的保留较弱,同时会出现峰形拖尾的情况。为改善峰形,增加保留时间,提高定量准确性,考察了DTIC在不同pH值的缓冲盐体系(磷酸盐、醋酸铵等)、乙腈、甲醇及乙腈/甲醇不同体积比的混合液等流动相体系中的保留行为,以保留时间和分离度为指标,确定最优色谱条件(见1.3节)。在此条件下正常组小鼠尿液样品和正常组小鼠加标尿液样品的色谱图见图3。从图3中可以看出,达卡巴嗪保留时间在5.3 min,尿液中的内源性物质对达卡巴嗪干扰少,峰形良好。表 1 DTIC在C57BL/6小鼠尿液中3个加标水平下的 回收率(n=5)Table 1 Recovery of DTIC spiked in a urine sample of C57BL/6 mouse (n=5) Added/(μg/mL) Found (Mean±SD)/(μg/mL) Recovery/% RSD/% 50.0 49.5± 1.6 98.9 3.2 375 381± 5 102 1.3 500 485± 6 99.1 1.2 表 2 DTIC在C57BL/6小鼠尿液中的日内及日间精密度(n=6) Table 2 Inter-day and intra-day precision of DTIC in C57BL/6 mouse urine (n=6) Test Added/(μg/mL) Found/(μg/mL) RSD/% Inter-day 50.0 49.2± 1.7 3.4 250 258± 10 3.7 500 500± 5 0.9 Intra-day 50.0 47.5± 2.0 4.3 250 254± 4 1.5 500 495± 5 1.1
本文编号:2920965
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