新型微管抑制剂6a对耐药肿瘤细胞KB/V的生长抑制作用研究

发布时间：2020-12-18 22:50

　　研究背景与目的多药耐药（MDR）是指耐药肿瘤对结构与功能部分或完全不相关的抗肿瘤药物表现显著抗药性。研究表明,多药耐药现象是导致恶性肿瘤化疗失败的关键原因。化疗药物的临床广泛应用过程中出现的多药耐药现象,严重限制药物的治疗效果与应用周期。口腔癌是一种严重的、死亡率高的恶性肿瘤疾病。长春新碱（vincristine）是治疗口腔癌的基础化疗药物之一,多药耐药现象是降低长春新碱对口腔癌临床疗效的主要因素。与靶向紫杉醇类结合位点（如紫杉醇）或长春碱类结合位点（如长春新碱）药物相比,靶向秋水仙碱结合位点的化合物可能具有克服P-gp调控的肿瘤多药耐药的化学结构优势。6a是一种能与秋水仙碱结合位点展现高亲和力的新型化合物。在本论文中,我们筛选了 6a对多种敏感株及其耐药株肿瘤细胞的抗肿瘤活性,在此基础上探讨了 6a对长春新碱耐受的人口腔癌表皮样细胞KB/V的生长抑制作用及分子机制。实验方法1.6a对耐药肿瘤细胞株的体外活性检测。采用MTT法检测多种耐药细胞（BEL7402/5-FU,MCF-7,KB/V）的耐药性,在确定细胞具有稳定耐药性的基础上,采用MTT法、克隆形成方法检测了 6a与秋水仙碱对多... 

【文章来源】：山东大学山东省 211工程院校 985工程院校 教育部直属院校

【文章页数】：77 页

【学位级别】：硕士

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摘要
ABSTRACT
符号说明
前言
    1. 肿瘤多药耐药性（ MDR）的现状与治疗策略
        1.1. P-gp与MDR
        1.2. P-gp与克服肿瘤多药耐药
        1.3. PTEN/Akt信号通路与MDR
    2. 长春新碱及其临床应用现状
        2.1. 长春新碱与口腔癌
        2.2. 长春新碱与肿瘤耐药
    3. 微管蛋白抑制剂
        3.1. 微管蛋白抑制剂与细胞周期
        3.2. 秋水仙碱类微管蛋白抑制剂
    4. 本课题的研究内容
实验材料
    1. 化合物与药物
    2. 细胞株
    3. 试剂
    4. 试剂配制
    5. 仪器设备
实验方法
    1. 细胞培养
    2. 抗肿瘤耐药细胞活性筛选实验
        2.1. 耐药倍数测定实验
        2.2. 6a与秋水仙碱抑制耐药细胞生长的活性筛选
    3. 细胞生长抑制实验
    4. 克隆形成抑制实验
    5. 裸鼠移植瘤生长抑制实验
    6. 罗丹明123胞内蓄积实验
    7. 微管蛋白免疫荧光染色实验
    8. 细胞周期检测
    9. Hoechst 33342染色实验
    10. Annexin V-FITC/PI双染实验
    11. JC-1染色检测线粒体膜通透性实验
    12. Western blotting实验
        12.1 蛋白提取实验
        12.2 电泳及显影实验
    13. 统计学数据分析
实验结果
    1. 抗耐药细胞株的活性筛选
        1.1. 耐药倍数的测定结果
        1.2. 6a和秋水仙碱对耐药细胞株的生长抑制作用
    2. 6a对KB细胞及KB/V细胞的生长抑制作用
    3. 6a抑制KB/V细胞的克隆形成
    4. 6a抑制裸鼠KB/V移植瘤的生长
    5. 6a对KB/V细胞内耐药蛋白P-gp功能和表达的影响
        5.1. 6a对KB/V细胞内P-gp外排功能的影响
        5.2. 6a对P-gp蛋白表达水平的影响
    6. 6a抑制KB/V细胞内微管蛋白的聚合
    7. 6a对KB/V细胞周期分布的影响
        7.1. 6a 诱导KB/V细胞G2/m期阻滞
        7.2. 6a调节KB/V细胞周期相关蛋白的表达
    8. 6a诱导KB/V细胞凋亡
        8.1. Hoechst 33342染色法观察细胞核形态学变化
        8.2. Annexin V-FITC/PI双染法定量检测细胞凋亡作用
        8.3. 6a诱导KB/V细胞凋亡作用的机制研究
    9. 6a抑制KB/V细胞内的PTEN/Akt/NF-κB信号通路
讨论
结论
参考文献
致谢
攻读硕士学位期间发表论文
学位论文评阅及答辩情况表



本文编号：2924739