高亲和力重组人硫氧还蛋白还原酶的原核表达、纯化和初步活性鉴定

发布时间：2020-12-18 23:32

　　目的:分离纯化高亲和力的人硫氧还蛋白还原酶（TrxR）蛋白,完成初步的活性鉴定。方法:优化重组人TrxR蛋白的原核表达条件,再通过亲和层析法分离纯化得到高纯度的TrxR重组蛋白。采用5,5′-二硫双（2-硝基苯甲酸）（DNTB）法比较重组人TrxR蛋白、商业化鼠肝提取TrxR蛋白以及重组人TrxR-ΔC蛋白的酶活力,并用TrxR特异性抑制剂金诺芬（Auranofin）分别检测其对三种蛋白的抑制效率。结果:优化了重组人TrxR蛋白的原核表达条件,得到高纯度目的蛋白。在8个测量时间点（120～330 s）,TrxR的吸光度>pET-TRS_TER>TrxR-ΔC（P<0.05）。TrxR和pET-TRS_TER的抑制率随抑制剂浓度的减小而减小;TrxR-ΔC蛋白在抑制剂浓度0.000 004 77μmol/mL的活性低于其他10个浓度（0.019 50～5.000 00μmol/mL）（P<0.05）;抑制剂在0.000 019 1μmol/mL浓度时蛋白活性低于抑制剂浓度为5.000 00μmol/mL（P<0.05）... 

【文章来源】：皖南医学院学报. 2020年05期

【文章页数】：4 页

【部分图文】：

图1 两种诱导温度下的TrxR重组蛋白诱导时间优化

破碎诱导不同时间后的菌体,通过SDS-PAGE凝胶电泳,观察上清液与沉淀中的目的蛋白的含量,比较不同诱导时间后的上清溶液中TrxR蛋白的含量差异。结果显示:3个时间点的目的蛋白大部分存在于上清液中,且上清液中的目的蛋白表达量基本相同(图2)。2.3 TrxR蛋白的纯化与鉴定

结果显示,当测量时间为30 s时,3种蛋白之间差异无统计学意义(P>0.05)。当测量时间为60 s和90 s时,TrxR和pET-TRSTER之间差异无统计学意义(P>0.05),但均高于 TrxR-ΔC的吸光度(P<0.05)。其他8个测量时间点, TrxR的吸光度>pET-TRSTER>TrxR-ΔC(P<0.05)。见表1。2.5 金诺芬对3种蛋白的活性抑制效果


本文编号：2924803