载有趋化因子12的长效PLGA微球的制备和体外表征

发布时间：2020-12-19 19:00

　　趋化因子12[chemokine（C-X-C motif）ligand 12,CXCL12]作为一种化学引诱剂,具有促进干细胞增殖的作用,在干细胞治疗中可用于治疗心肌梗死等疾病。但由于CXCL12蛋白分子结构复杂,半衰期较短,注射给药后作用时间短暂。本试验在保持CXCL12生物活性的前提下,制备其长效微球。首先,将CXCL12溶于含葡聚糖和聚乙二醇（PEG）的混合溶液中,通过冷冻相分离法制备蛋白-葡聚糖颗粒,从而维持蛋白的分子构象。然后,分别通过水包油包固（s/o/w）法和水包油包水（w/o/w）法,以具有生物可降解性的聚乳酸-羟基乙酸共聚物（PLGA）为载体制备载CXCL12-葡聚糖颗粒或CXCL12的微球（F1和F2微球）。结果显示,s/o/w法和w/o/w法制备的微球粒径为（63.17±21.54）和（28.98±10.29）μm,包封率分别为（46.07±1.75）%和（30.86±1.17）%。F1微球中的药物可持续释放超过60 d,且较符合零级释放模型,突释低（3%）;而F2微球的突释率高（9%）,持续释放时间仅为25 d。通过大鼠骨髓间充质干细胞的增殖试验测定了体外释放过... 

【文章来源】：中国医药工业杂志. 2020年08期 北大核心

【文章页数】：8 页

【部分图文】：

F1和F2微球中不同时间点释出的1的生物活性(n=3)

以“2.5.1”项下制备的大鼠骨髓间充质干细胞为模型,探究PLGA微球载药体系的体外安全性与稳定性。体外安全性试验主要探究体外释放试验中仅包载DEX的微球和PLGA空白微球(即F3和F4微球)的释放液对细胞增殖的影响,而体外稳定性试验则考察了在-20 ℃干燥状态下保存3个月的F1微球中1生物活性的变化。各组微球照“2.4”项下方法进行体外释放试验,在d1、d7、d22和d49时取释放液,以PBS为阴性对照组,照“2.5.2”项下方法进行增殖试验,并用CellTiter-Blue细胞活力测定试剂盒来测定细胞活力,以探究释出蛋白对大鼠骨髓间充质干细胞增殖的影响,进而验证该体系的安全性和稳定性。试验结果见图7。由图7可见,在其他条件相同的前提下,F3微球组和F4微球组的细胞增殖数目相较于PBS组无显著性差异,证明此微球体系对细胞增殖的影响不显著,具有较高的体外安全性。而新鲜制备及贮存3个月的F1微球组的细胞增殖数目相较于PBS组具有显著性差异,说明2组微球释放液中的1都具有较高的生物活性。对比2组F1微球的效果,虽然从荧光强度来看,放置3个月后的F1微球组,尤其是释放试验后期时,所得细胞的荧光强度稍弱,但彼此间无显著性差异,说明在一定时间内此微球载药体系对药物生物活性的保护效果良好,即该载药体系的体外稳定性较好。

另称取多组载药微球10 mg,照上述操作进行体外释放试验,用于观察其在释放试验的7、21和49 d的形貌。具体操作为:在体外释放试验的7、21和49 d,将不同组微球的体外缓释体系于-40 ℃冰箱中冷冻,而后转移至冻干机中,于-48 ℃、10 Pa条件下冷冻干燥48 h后,用扫描电镜观察微球形貌,结果见图5。图5 微球在体外缓释过程中的SEM照片(A和B:×100 000,C～F:×10 000)

【参考文献】：
期刊论文
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本文编号：2926415