季铵化壳聚糖修饰的超氧化物歧化酶抗骨关节炎的药效学研究

发布时间：2020-12-23 16:57

　　骨关节炎（osteoarthritis,OA）是一种常见的退行性骨关节病变,主要累及负重大关节,病程缓慢,病人活动受限甚至丧失生活自理能力。目前普遍认为OA是由机械和生物因素共同作用下,软骨基质、软骨细胞和软骨下骨的合成与降解发生失衡而形成的,涉及关节力学、细胞因子、氧化应激和遗传因素等方面。大量研究表明,氧化应激通过参与胞内信号传导、软骨细胞衰老和凋亡、胞外基质的合成和降解以及滑膜炎症等过程,对OA病情的发展起到非常重要的作用。因此,提高机体的抗氧化能力被认为是治疗OA的可行方案。超氧化物歧化酶（superoxide dismutase,SOD）是机体抗氧化酶系统的重要组成之一,能快速、高效地清除活性氧自由基（reactive oxygen species,ROS）,使其成为治疗ROS相关疾病的潜在酶类药物。本课题组前期针对SOD存在的缺点,采用季铵化壳聚糖（6-0-2’-hydroxylpropyl trimethyl ammonium chloride chitosan,O-HTCC）成功地实现了对SOD的结构修饰,得到酶活保留率高、半衰期延长、入胞能力佳的结合物O-HTCC-S... 

【文章来源】：山东大学山东省 211工程院校 985工程院校 教育部直属院校

【文章页数】：93 页

【学位级别】：硕士

【文章目录】：
中文摘要
Abstract
符号说明
第一章 前言
    1. 骨关节炎概述
    2. 氧化应激与骨关节炎
        2.1 氧化应激
        2.2 骨关节炎的氧化应激机制
    3. 骨关节炎的治疗
        3.1 骨关节炎的临床治疗
        3.2 骨关节炎的抗氧化治疗
    4. 骨关节炎动物模型
    5. 本课题研究的目的和意义
        5.1 前期研究基础
        5.2 本课题拟解决的问题
第二章 O-HTCC-SOD的制备和表征
    1. 实验材料
        1.1 仪器
        1.2 试剂
        1.3 溶液
    2. 实验方法
        2.1 O-HTCC的合成
        2.2 O-HTCC的表征
        2.3 O-HTCC-SOD的制备和分离纯化
        2.4 O-HTCC-SOD的表征
    3. 实验结果与分析
        3.1 O-HTCC的结构表征
        3.2 O-HTCC-SOD的分离纯化
        3.3 O-HTCC-SOD的表征分析
    4. 讨论
        4.1 壳聚糖用作蛋白质药物修饰剂
        4.2 壳聚糖修饰蛋白类药物的方法
        4.3 壳聚糖修饰蛋白类药物的研究进展
    5. 本章小结
第三章 O-HTCC-SOD对软骨细胞损伤的保护作用
    1. 实验材料
        1.1 仪器
        1.2 实验试剂
        1.3 实验动物
        1.4 溶液
    2. 实验方法
        2.1 大鼠软骨细胞的分离、培养与鉴定
        2.2 O-HTCC-SOD的软骨细胞毒实验
        2.3 O-HTCC-SOD与MIA共同孵育对软骨细胞增殖的影响
        2.4 O-HTCC-SOD与MIA依次孵育对软骨细胞增殖的影响
        2.5 O-HTCC-SOD对MIA诱导的软骨细胞胞内ROS水平的影响
        2.6 数据处理
    3. 实验结果与分析
        3.1 大鼠软骨细胞的形态与鉴定
        3.2 O-HTCC-SOD对软骨细胞的毒性
        3.3 O-HTCC-SOD与MIA共同孵育对软骨细胞增殖的影响
        3.4 O-HTCC-SOD与MIA依次孵育对软骨细胞增殖的影响
        3.5 O-HTCC-SOD对软骨细胞胞内ROS水平的影响
    4. 讨论
    5. 本章小结
第四章 关节腔注射O-HTCC-SOD大鼠体内药动学初步研究
    1. 实验材料
        1.1 仪器
        1.2 试剂与耗材
        1.3 动物
        1.4 溶液
    2. 实验方法
        2.1 动物给药和分组方案
        2.2 关节滑液样品采集
        2.3 大鼠关节滑液中药物浓度检测
        2.4 数据处理
    3. 实验结果与分析
        3.1 关节腔单次注射给药后关节腔内SOD酶活残留量测定
        3.2 SOD和O-HTCC-SOD的关节腔消除动力学
    4. 讨论
    5. 本章小结
第五章 O-HTCC-SOD对大鼠骨关节炎的治疗作用
    1. 实验材料
        1.1 仪器
        1.2 试剂与耗材
        1.3 溶液
        1.4 实验动物
    2. 实验方法
        2.1 大鼠膝骨关节炎模型的制备、分组及给药方法
        2.2 大鼠膝骨关节炎模型的观察指标与评分方法
        2.3 大鼠膝骨关节炎痛感评价
        2.4 生化指标检测
        2.5 数据分析
    3. 实验结果
        3.1 大鼠OA模型的建立
        3.2 大鼠膝关节的大体及组织学评价
        3.3 O-HTCC-SOD对MIA诱导大鼠膝关节痛感的缓解作用
        3.4 大鼠外周血清中IL-1β、IL-6和TNF-α的含量
        3.5 大鼠膝关节滑膜组织匀浆中MDA和GSH的含量
    4. 讨论
    5. 本章小结
第六章 总结与展望
    1. 总结
    2. 展望
参考文献
致谢
攻读硕士学位期间学术成果
学位论文评阅及答辩情况表


【参考文献】：
期刊论文
[1]骨关节炎动物模型的研究进展[J]. 卢向阳,唐芳,马武开,姚血明,陈琳英,周静.  风湿病与关节炎. 2017(02)
[2]中国40岁以上人群原发性骨关节炎患病状况调查[J]. 薛庆云,王坤正,裴福兴,朱汉民,金大地,陶天遵,李恩,李宁华,张耀南,王晓滨,纪泉.  中华骨科杂志. 2015 (12)
[3]6-O-季铵化壳聚糖修饰超氧化物歧化酶的制备及性质研究[J]. 许玲华,宋春霞,王凤山,刘纯慧.  中国药学杂志. 2015(10)
[4]不同浓度木瓜蛋白酶建立兔膝骨关节炎模型的比较研究[J]. 韩冠英,凌沛学,王凤山,王桂兰,邵华荣.  中国骨伤. 2012(05)
[5]骨关节炎诊断及治疗指南[J].   中华风湿病学杂志. 2010 (06)
[6]关节腔内注射不同蛋白酶建立兔膝骨关节炎模型的对比研究[J]. 邓宇,伍筱梅,任医民,钱元新,吴玉新,杨通.  中华关节外科杂志(电子版). 2009(03)
[7]壳聚糖关节腔注射对膝骨性关节炎关节功能的影响对比研究[J]. 康小平,叶永杰.  创伤外科杂志. 2006(05)

博士论文
[1]低分子量硫酸软骨素的制备、抗补体活性构效关系及治疗骨性关节炎的实验研究[D]. 李连.山东大学 2016
[2]关节腔注射黄原胶动物体内药代动力学研究[D]. 邵华荣.山东大学 2015
[3]黄原胶注射液的研制及其对实验性骨关节炎疗效和作用机制的研究[D]. 韩冠英.山东大学 2012
[4]羧甲基壳聚糖对大鼠骨关节炎软骨细胞NF-κB信号通路的影响[D]. 丁万军.武汉大学 2011

硕士论文
[1]日柏醇抗骨性关节炎的作用及其机制的研究[D]. 李金.浙江大学 2015



本文编号：2934035