抗体介导的靶向于EGFR的阿法替尼免疫脂质体的设计及评价

发布时间：2020-12-24 23:33

　　非小细胞肺癌（non-small-cell lung cancer,NSCLC）约占肺癌的85%,是癌症致死的主要原因之一。75%的患者发现时已处于中晚期,转移后生存率较低,多在一年内死亡。2004年,研究发现NSCLC与表皮生长因子受体（epidermal growth factor receptor,EGFR）突变有关,之后作用于受体胞内的酪氨酸激酶抑制剂（tyrosine kinase inhibitor,TKI）和作用于受体胞外的单克隆抗体（monoclonal antibody,mAb）被广泛用于临床治疗。然而,TKI和mAb联合应用会导致一系列不良反应,严重时需中断治疗。本研究采用EGFR-TKI类药物阿法替尼（afatinib,AFT）作为模型药物,包载在脂质体内,人鼠嵌合型抗体类药物西妥昔单抗（cetuximab,CTX）作为靶头修饰在脂质体表面,旨在构建主动靶向于NSCLC的新型递药系统。采用硫酸铵梯度法制备阿法替尼脂质体（liposome,LP）,与巯基化的CTX共孵育制备免疫脂质体（LP-CTX）。使用两种NSCLC细胞系进行体外评价,以研究CTX-EGFR结合对... 

【文章来源】：烟台大学山东省

【文章页数】：102 页

【学位级别】：硕士

【文章目录】：
摘要
Abstract
符号说明
1 前言
    1.1 非小细胞肺癌的研究进展
        1.1.1 非小细胞肺癌的概述
        1.1.2 非小细胞肺癌的临床治疗现状
    1.2 阿法替尼的研究进展
        1.2.1 阿法替尼的概述
        1.2.2 阿法替尼的临床应用
    1.3 西妥昔单抗的研究进展
        1.3.1 西妥昔单抗的概述
        1.3.2 西妥昔单抗的临床应用
    1.4 脂质体的研究现状
    1.5 免疫脂质体的研究现状
    1.6 课题设计思路
2 AFT-LP的制备
    2.1 仪器与试剂
        2.1.1 实验仪器
        2.1.2 材料和试剂
    2.2 试验方法
        2.2.1 制备工艺的选择
        2.2.2 AFT含量测定方法的建立
        2.2.3 AFT-LP的纯化方法
        2.2.4 不同制备工艺脂质体包封率和粒径的测定
        2.2.5 单因素考察
        2.2.6 响应面设计优化法
    2.3 结果与讨论
        2.3.1 制备工艺的选择
        2.3.2 测定方法的验证
        2.3.3 AFT-LP的纯化方法
        2.3.4 包封率方法的确立
        2.3.5 不同制备工艺脂质体包封率和粒径的测定
        2.3.6 单因素考察
        2.3.7 响应面设计优化法
        2.3.8 最优处方的确立
    2.4 小结
3 LP-CTX的制备
    3.1 仪器与试剂
        3.1.1 实验仪器
        3.1.2 材料和试剂
    3.2 实验方法
        3.2.1 Traut’s试剂的测定方法
        3.2.2 CTX含量的测定方法
        3.2.3 CTX的巯基化
        3.2.4 LP-CTX的合成
    3.3 结果与讨论
        3.3.1 Traut’s试剂的测定方法
        3.3.2 CTX含量的测定方法
        3.3.3 CTX的巯基化
        3.3.4 LP-CTX的合成
    3.4 小结
4 LP与 LP-CTX的表征
    4.1 仪器与试剂
        4.1.1 实验仪器
        4.1.2 材料和试剂
    4.2 试验方法
        4.2.1 形态、粒径和Zeta电位的测定
        4.2.2 包封率与载药量的测定
        4.2.3 体外释放度的测定
    4.3 结果与讨论
        4.3.1 形态、粒径和Zeta电位的测定
        4.3.2 包封率与载药量的测定
        4.3.3 体外释放度的测定
    4.4 小结
5 LP-CTX的体外细胞评价
    5.1 仪器与试剂
        5.1.1 实验仪器
        5.1.2 材料和试剂
    5.2 试验方法
        5.2.1 细胞培养
        5.2.2 细胞毒性研究
        5.2.3 细胞摄取研究
    5.3 结果与讨论
        5.3.1 细胞毒性研究
        5.3.2 细胞摄取研究
    5.4 小结
6 LC-MS/MS检测方法的建立
    6.1 仪器与试剂
        6.1.1 实验仪器
        6.1.2 材料和试剂
    6.2 实验方法
        6.2.1 质谱方法的建立
        6.2.2 液相方法的建立
        6.2.3 标准溶液、IS与 QC的制备
        6.2.4 血浆样品预处理方法
        6.2.5 分析方法的验证
    6.3 结果与讨论
        6.3.1 质谱方法的建立
        6.3.2 液相条件的建立
        6.3.3 分析方法的验证
    6.4 小结
7 LP-CTX的体内动物评价
    7.1 仪器与试剂
        7.1.1 实验仪器
        7.1.2 材料和试剂
        7.1.3 实验动物
    7.2 实验方法
        7.2.1 大鼠体内血药浓度测定
        7.2.2 H1975 荷瘤小鼠模型的建立
        7.2.3 荷瘤小鼠体内组织分布
        7.2.4 小动物活体成像研究
        7.2.5荷瘤小鼠肿瘤抑制实验
    7.3 结果与讨论
        7.3.1 大鼠体内血药浓度测定
        7.3.2 荷瘤小鼠体内组织分布
        7.3.3 小动物活体成像研究
        7.3.4 荷瘤小鼠肿瘤抑制试验
    7.4 小结
8 全文结论
参考文献
攻读学位期间发表的学术论文目录
致谢



本文编号：2936514