基于“碘-罗丹明B”缔合物荧光探针测定β-内酰胺酶活性

发布时间：2020-12-25 07:29

　　碘（I₃^-）对罗丹明B（RB）具有荧光猝灭作用,可使RB的荧光信号强度减弱甚至消失,而β-内酰胺酶作用下的青霉素水解产物青霉噻唑酸可将I₃^-还原为I^-,使体系荧光信号再现,据此建立了以碘-罗丹明B缔合物为荧光探针测定药剂中青霉素含量的新方法。在激发波长360nm,发射波长580nm条件下进行了β-内酰胺酶活性的荧光测定。结果表明,在0～2.4U/mL范围内,β-内酰胺酶活性与其荧光强度变化值呈良好的线性关系,检出限为0.002U/mL。方法的加标回收率为96.67%～103.3%,相对标准偏差（n=6）2.0%～4.5%。该方法简便快速、准确可靠、灵敏度高,成功用于自制酶液酶活性测定。 

【文章来源】：中国抗生素杂志. 2020年10期

【文章页数】：4 页

【部分图文】：

不同体系的荧光光谱

在RB+I3-体系中，考察了碘液用量对RB荧光猝灭的影响(图2)。结果表明，随着碘液量的增加，RB的荧光强度逐渐降低，在0～2m L碘液用量范围内，线性度较好。当碘液加入量增加到4.00m L时，RB的荧光强度开始呈现平缓趋势，当碘液增加到6.00m L时，RB的荧光强度趋于稳定。为了得到较为准确的实验结果，选择碘液用量为2.00m L。2.4 缔合物p H环境考察

取15U/m Lβ-内酰胺酶标准溶液4.00m L，改变酶促反应时间并完成PNC+I3-+RB体系荧光强度测定(图4)。结果表明，随着酶促反应时间延长，青霉噻唑酸还原碘导致I3-浓度下降，PNC+I3-+RB体系荧光强度递增，在0～10min内，F与时间有线性关系，符合酶催化一级反应特征。13min后，F达到最大并趋于恒定，故酶促反应时间确定为15min。图4 酶促反应时间曲线

【参考文献】：
期刊论文
[1]罗丹明B荧光猝灭法测定水中碘[J]. 乔玉春,龙大成,孙宗招,郑滢婷,陈丽君,王桦.  化学传感器. 2018(01)
[2]碘标准溶液配制方法改进[J]. 白莹,张小林.  化学教育(中英文). 2018(04)
[3]紫外分光光度法用于青霉素酶活力测定的研究[J]. 马韦钰,马仕洪.  药物分析杂志. 2017(06)
[4]羟胺法测定青霉素酶酶活的研究[J]. 王芳,仪宏,王丽丽.  中国抗生素杂志. 2010(04)
[5]罗丹明B荧光猝灭法测定微量溴酸根离子[J]. 王海霞,盛丽,韩小茜.  光谱实验室. 2007(04)
[6]罗丹明B荧光猝灭法测定水中痕量亚氯酸根[J]. 康彩艳,蒋治良,奚旦立.  光谱学与光谱分析. 2007(02)
[7]罗丹明B荧光光谱机理的研究[J]. 黄保军,李建军,屈凌波.  天津师范大学学报(自然科学版). 2005(03)
[8]蜡样芽孢杆菌CMCC(B)63301产生青霉素酶的特性及其应用的研究[J]. 张凤凯,张枫.  药物分析杂志. 1999(03)



本文编号：2937215