LC-MS/MS法测定细胞培养液中6个细胞色素P450酶代谢产物的浓度

发布时间：2020-12-25 12:06

　　目的:采用LC-MS/MS法测定细胞培养液中6个酶代谢底物对应代谢产物（1-7二甲基黄嘌呤、7-羟基香豆素、4-羟基美芬妥英、1-羟基咪达唑仑、6-羟基氯唑沙宗、4-羟基甲苯磺丁脲）的浓度。方法:生物样品用液-液萃取法进行预处理;采用Agilent ZORBAX SB-C₁₈（2.1 mm×150 mm,5μm）色谱柱,以甲醇-水（75∶25）为流动相,流速为0.3 mL·min^-1,柱温为35℃,硝西泮为内标,通过电喷雾离子化四极杆串联质谱,分别以正、负离子选择反应监测方式（SRM）检测。结果:6个酶代谢产物的线性范围均为1～500 ng·mL^-1,定量下限均为1 ng·mL^-1;日内和日间RSD分别小于9.9%和10.7%;准确度在92.9%～110.0%;提取回收率为71.9%～98.6%;基质效应为90.1%～106.5%;稳定性良好。结论:该方法灵敏、准确、简单、快速,可用于细胞培养液中6个CYP450酶代谢产物的测定。 

【文章来源】：药物分析杂志. 2020年09期 北大核心

【文章页数】：10 页

【部分图文】：

ESI正离子同时测定4个酶代谢产物的色谱图

ESI负离子同时测定2个酶代谢产物的色谱图

测定结果显示检测到5个代谢产物，分别为1-7二甲基黄嘌呤、7-羟基香豆素、1-羟基咪达唑仑、6-羟基氯唑沙宗、4-羟基甲苯磺丁脲，说明诱导后的细胞具备CYP1A2、CYP2A6、CYP2C9、CYP2E1、CYP3A4酶的活性，经过蛋白定量后的结果显示，与对照组相比，各组酶产物均显著升高（P<0.05);CYP1A2酶活性在LHS-5d组最高；其次是CCl4-LHS-3d组、CCl4-LHS-5d、7d组逐渐降低（P<0.05);CYP2A6酶活性在LHS-5d、CCl4-LHS-3d、CCl4-LHS-5d时最高（P<0.05);CYP2C9酶活性各组间无显著性差别（P>0.05);CYP2E1酶活性在LHS-3d、LHS-5d时最高（P<0.05);CYP3A4酶活性在LHS-3d时最高（P<0.05）。结果见图3。与LHS-3d组相比，CCl4-LHS-3d组3个指标的表达水平显著升高，1个指标表达水平显著降低；1个指标的表达水平不变；与LHS-5d组相比，CCl4-LHS-5d组3个指标的表达水平显著降低，2个指标的表达水平不变；与LHS-7d组相比，CCl4-LHS-7d组1个指标表达水平显著降低，4个指标的表达水平不变（P<0.05）。结果见表7。

【参考文献】：
期刊论文
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本文编号：2937617