A54多肽修饰氧化还原响应型糖脂纳米载体的构建与评价

发布时间：2017-04-09 02:00

  本文关键词：A54多肽修饰氧化还原响应型糖脂纳米载体的构建与评价，，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：功能性纳米给药系统的设计与评价,旨在克服现有纳米给药系统稳定性差、靶向性不足、不能有效释放药物等缺陷,近年来已成为药剂学领域研究的热点之一。本研究利用肿瘤细胞内外还原型谷胱甘肽(GSH)的浓度差异(100～1000倍),以及肿瘤细胞与正常细胞之间的浓度差异(7-10倍),设计得到还原敏感型的糖脂纳米载体(CSO-ss-SA),并进一步构建A54多肽修饰聚乙二醇(PEG)化的还原敏感型糖脂纳米载体(A54-PEG-CSO-ss-SA)。A54多肽经PEG链接修饰的嫁接物胶束,可延长体内循环时间,提高嫁接物胶束的肿瘤组织靶向分布。二硫键作为糖脂间的桥链,特异性响应肿瘤组织内环境较高的GSH浓度,发生二硫键断裂,迅速释放药物,正常组织内无GSH浓度的响应性,释放药物少,可实现纳米给药系统的高效安全治疗。本研究以3,3-二硫代二丙酸作为交联剂,合成二硫键糖脂嫁接物(CSO-ss-SA),采用碳二亚胺(EDC)偶联法、N,N’-二琥珀酰亚胺基碳酸酯(DSC)为链桥,合成A54-PEG-CSO-ss-SA。A54-PEG-CSO-ss-SA嫁接物可在水性介质中自聚集形成胶束,其数均粒径为50.83±10.4 nm,分布均匀,临界胶束浓度为54.9μg/mL。以阿霉素(DOX)为模型药物,经透析法制备嫁接物载药纳米粒(A54-PEG-CSO-ss-SA/DOX),其数均粒径为48.36±4.3 nm,包封率为77.92%,在10 mM GSH浓度条件下,快速释放包封药物DOX。体外细胞摄取实验结果表明,A54多肽修饰的纳米载体,可加快BEL-7402细胞摄取,增加细胞内的药物浓度。以尼罗红(NR)为模型药物,二硫键链接的糖脂纳米载体(A54-PEG-CSO-ss-SA)细胞内释放速率明显大于非二硫键链接的糖脂纳米载体(A54-PEG-CSO-SA)。 A54-PEG-CSO-ss-SA/DOX的IC50值为1.34±0.58μg/mL,明显低于CSO-ss-SA/DOX及非敏感对照A54-PEG-CSO-SA/DOX给药系统的IC50值,药物细胞毒性提高了0.6-1.0倍。以荷BEL-7402瘤裸鼠为模型动物,A54-PEG-CSO-ss-SA/DiR体内分布结果表明,A54多肽的修饰能够显著增加嫁接物胶束在肿瘤部位的分布,且能够维持较长时间。FITC标记纳米载体,以NR为模型药物,体内药物释放结果表明,A54-PEG-CSO-ss-SA嫁接物胶束能够特异性响应肿瘤组织内较高GSH浓度,快速释放药物,而肝脏组织内基本无药物释放；心脏组织切片的荧光照片显示,A54-PEG-CSO-ss-SA嫁接物胶束在心脏组织内未见有明显分布。模型动物药效学研究结果显示,等剂量的A54-PEG-CSO-ss-SA/DOX嫁接物载药纳米粒,其疗效与市售阿霉素制剂相当,其正常组织内游离药物浓度,以及心脏组织内药物分布,均明显低于市售制剂,具有较高的安全性。本研究结果表明,A54-PEG-CSO-ss-SA嫁接物胶束具有较好的BEL-7402肝癌组织靶向性,在靶细胞内快速释放药物,提高药物疗效。同时,可减少正常组织及心脏的化疗药物毒性,提高用药安全性,是一种具有潜在发展优势的主动靶向纳米给药系统。
【关键词】：糖脂纳米胶束 主动靶向 氧化还原响应 肿瘤细胞内环境释放 减少化疗药物毒性
【学位授予单位】：浙江大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R943
【目录】：

• 致谢4-5
• 中文摘要5-7
• Abstract7-13
• 引言13-15
• 第一章 A54多肽修饰的PEG化还原敏感型糖脂纳米载体的合成及理化性质研究15-27
• 1.1 仪器与试剂15-16
• 1.1.1 仪器15
• 1.1.2 试剂15-16
• 1.2 实验方法16-19
• 1.2.1 还原敏感型糖脂嫁接物(CSO-ss-SA)的合成16
• 1.2.2 A54多肽修饰PEG化还原敏感型糖脂嫁接物(A54-PEG-CSO-ss-SA)合成16-17
• 1.2.3 A54-PEG-CSO-ss-SA嫁接物结构确证17
• 1.2.4 CSO-ss-SA嫁接物的氨基取代度测定17
• 1.2.5 嫁接物临界胶束浓度测定17-18
• 1.2.6 嫁接物胶束粒径、表面电位测定及透射电镜观察18
• 1.2.7 A54-PEG-CSO-ss-SA嫁接物胶束还原敏感性研究18-19
• 1.3 结果与讨论19-25
• 1.3.1 A54-PEG-CSO-ss-SA嫁接物的合成与结构确证19-21
• 1.3.2 CSO-ss-SA嫁接物的氨基取代度21
• 1.3.3 嫁接物临界胶束浓度21-22
• 1.3.4 嫁接物胶束粒径、表面电位测定及透射电镜观察22-23
• 1.3.5 A54-PEG-CSO-ss-SA嫁接物胶束还原敏感性研究23-25
• 1.4 本章小结25-27
• 第二章 A54多肽修饰PEG化还原敏感型糖脂嫁接物载阿霉素纳米粒制备及理化性质研究27-35
• 2.1 仪器与试剂27-28
• 2.1.1 仪器27
• 2.1.2 试剂27-28
• 2.2 实验方法28-30
• 2.2.1 碱基阿霉素的制备28
• 2.2.2 载药纳米粒制备28
• 2.2.3 载药纳米粒的粒径与表面电位28
• 2.2.4 载药纳米粒透射电镜观察28-29
• 2.2.5 载药纳米粒的载药量与包封率测定29
• 2.2.6 载药纳米粒的体外药物释放29-30
• 2.3 结果与讨论30-33
• 2.3.1 载药纳米粒制备30-31
• 2.3.2 载药纳米粒的粒径与表面电位31-32
• 2.3.3 载药纳米粒包封率与载药量32
• 2.3.4 载药纳米粒药物释放动力学32-33
• 2.4 本章小结33-35
• 第三章 载阿霉素纳米粒的抗肿瘤药效学研究35-55
• 3.1 仪器与试剂35-36
• 3.1.1 仪器35
• 3.1.2 试剂35-36
• 3.2 实验方法36-40
• 3.2.1 细胞培养36
• 3.2.2 载药纳米粒的细胞摄取36-37
• 3.2.3 载药纳米粒的细胞内药物释放37
• 3.2.4 载药纳米粒的细胞药效37-38
• 3.2.5 荷瘤裸鼠模型的建立38
• 3.2.6 嫁接物胶束体内分布38
• 3.2.7 载药纳米粒体内药物释放38-39
• 3.2.8 载药纳米粒在模型动物的药效39-40
• 3.3 结果与讨论40-52
• 3.3.1 载药纳米粒的细胞摄取40-44
• 3.3.2 载药纳米粒细胞内药物释放44-46
• 3.3.3 载药纳米粒的细胞毒性46-48
• 3.3.4 嫁接物胶束的体内分布48-49
• 3.3.5 载药纳米粒体内药物释放49-50
• 3.3.6 载药纳米粒体内抗肿瘤药效研究50-52
• 3.4 本章小结52-55
• 结论55-57
• 参考文献57-61
• 综述61-81
• 参考文献75-81
• 作者简历81

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本文编号：294182