蟾毒灵联合索拉非尼对肝癌细胞增殖的影响

发布时间：2021-01-01 17:51

　　【研究背景】肝细胞肝癌（hepatocellular carcinoma,HCC）占原发性肝癌的百分之八十到九十。肝癌的发病率死亡率均位于肿瘤前列,其中,我国肝癌的病死率位居所有肿瘤的第二位,仅次于肺癌。我国肝癌患者被诊断时多已处于进展期或晚期,同时伴随着血行转移和癌栓形成,直接导致我国肝癌术后五年生存率与欧美发达国家相比处于较低的水平。因此,如何治疗肝癌和改善肝癌手术的预后尤为重要。目前,化疗是临床上治疗肝癌常用的手段之一。常用的化疗药物有索拉非尼、贝伐单抗、舒尼替尼、厄洛替尼等。索拉非尼（Sorafenib,SOR）是多激酶抑制剂,主要通过抑制肿瘤血管的生成抑制肿瘤进展,在中晚期肝癌的治疗中取得了较好的效果,能显著延长中晚期肝癌患者的生存期。然而,临床研究发现在索拉非尼治疗中,会有一部分患者对其产生耐药性,并会产生一定的毒副作用,给该药物的临床应用造成较大的影响。因此,深入研究索拉非尼的耐药机制、提高其疗效已成为索拉非尼抗肿瘤研究的热点之一。近年来的研究表明,从中草药中提取的多种活性成份具有较好的抗肿瘤潜力。中药活性成分联合化疗药物使用可以有效降低其耐药性,减少毒副作用,提高其抗肿... 

【文章来源】：河南大学河南省

【文章页数】：69 页

【学位级别】：硕士

【部分图文】：

蟾毒灵对肝癌细胞LDH释放毒性实验

第一章蟾毒灵抑制肝癌细胞增殖的研究7图1-2.蟾毒灵对肝癌细胞LDH释放毒性实验。Fig1-2ThetoxicityofBufalintoHCCwasdeterminedbyLDHmethod.*P<0.05,**P<0.01,***P<0.001.3.2乳酸脱氢酶(LDH)释放检测蟾毒灵对肝癌细胞的毒性乳酸脱氢酶在包浆内含量丰富，当细胞受损或死亡时会引起细胞膜结构发生破坏，导致细胞浆内的酶释放到培养液中，并与细胞死亡数目成正比。因此，可以通过检测培养液中乳酸脱氢酶的活性大小来间接评估药物对细胞的毒性作用。根据MTT实验结果选取IC50实验结果显示，与对照组相比，给药组的LDH释放量与最大酶活性组的比率而逐渐上升，500nM为16.21%、1000nM为18.22%、2000nM为25.43%。说明细胞死亡的数目也增多，大剂量的给药浓度对细胞的毒性较大。图1-1不同药物浓度的蟾毒灵对SNU-739细胞存活率的影响（sx，n=5）*P<0.05，**P<0.01与对照组相比Fig1-1EffectsofdifferentdrugconcentrationsofbufalinonthesurvivalrateofSNU-739cellsThemeanvaluesweresignificantlydifferentcomparedwiththecontrolgroup.*P<0.05,**P<0.01.

蟾毒灵联合索拉非尼对肝癌细胞增殖的影响8图1-4.蟾毒灵影响肝癌细胞细胞克隆形成。Fig1-4BufalinsuppressedcolonyformationinHCCcancercells.*P<0.05,**P<0.01,***P<0.0013.3显微镜下观察蟾毒灵对肝癌细胞形态的影响为了研究蟾毒灵对肝癌细胞生存的影响，根据MTT结果可知蟾毒灵对肝癌细胞IC50为1000nM。选取IC50前后浓度梯度，分别设0nm、500nM、1000nM、2000nM的浓度梯度，分为四组。药物作用48h后，用倒置显微镜观察拍照，500nM组虽然有部分细胞开始变圆脱落，但总体细胞量与对照组相比差异较小；1000nM时细胞脱落较多，细胞培养板内出现较多空隙。2000nM组在细胞培养孔中的肝癌SNU-739细胞量很少，表明随着蟾毒灵药物浓度的增大，药物对细胞的杀伤能力也加大，与MTT结果一致。图1-3不同浓度蟾毒灵作用下肝癌细胞形态的变化（×20倍）Fig1-3TheBufalinchangesofHCC.Therepresentativeimageswereobtainedbyphasecontrastmicroscopyat20×magnification.3.4克隆形成实验检测蟾毒灵对肝癌细胞增殖的影响。采用克隆形成实验检测蟾毒灵作用于肝癌细胞SNU-739细胞10天后对肝癌细胞克隆性增殖的影响。实验结果显示，蟾毒灵均能明显抑制肝癌细胞的克隆能力，其中抑制作用随着蟾毒灵的药物浓度的增大而上升。（图1-4）

【参考文献】：
期刊论文
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博士论文
[1]5-氟尿嘧啶磁性脂质体纳米粒在肝癌动物模型中的靶向性及药动学研究[D]. 刘鑫.中南大学 2006

硕士论文
[1]青蒿琥酯联合索拉非尼抗肿瘤作用的研究[D]. 刘硕.安徽理工大学 2019
[2]蟾酥化学成分及抗肿瘤活性筛选研究[D]. 赵彦敏.南京中医药大学 2017



本文编号：2951730