大黄素和端粒酶抑制剂联合应用引起端粒功能异常和细胞死亡
发布时间：2021-01-04 15:04
目的:端粒对基因组的稳定性起着重要作用,端粒功能异常与疾病的发生息息相关。包括G四链体在内的高级结构,会引起端粒功能障碍,阻碍端粒酶识别并抑制端粒延长,导致端粒缩短。研究表明,一些小分子配体可以结合并稳定该结构,引起端粒DNA损伤并抑制端粒酶活性,进而抑制癌症的发生。然而,我们发现端粒酶可以修复这些端粒异常。在这里,我们试图回答G4稳定性配体和端粒酶抑制剂的联合应用是否可以诱导长期DNA损伤并抑制肿瘤生长。方法:（1）在天然化合物数据库中进行基于分子对接的虚拟筛选分析,以鉴定新型G4稳定性配体。通过圆二色光谱和紫外可见光谱的热变性实验进一步证明该配体（大黄素）对G4具有稳定作用。此外,采用IF-FISH的方法进一步证明大黄素对细胞内端粒G4的影响。（2）大黄素处理不同种类的细胞不同时间,采用IF-FISH和中期染色体FISH实验,检测大黄素对基因组DNA损伤和端粒功能的影响;采用TUNEL和SA-β-gal的方法检测大黄素对细胞凋亡和衰老的影响。（3）大黄素处理不同种类的细胞不同时间,采用TRAP和q-RT-PCR的方法检测大黄素对端粒酶活性的影响。（4）通过端粒酶抑制剂抑制端粒酶活性...
【文章来源】：天津医科大学天津市 211工程院校
【文章页数】：77 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
G4稳定性配体的虚拟筛选A.大黄素与杂交型G4结构的分子对接复合物；B.大黄素与反平行G4结构的分子对接复合物；C.圆二色光谱的热变性实验，解链温度（Tm）值反映了有无大黄素处理后G4的稳定性；D.紫外可见光谱的热变性实验，解链温度（Tm）值反映了有无大黄素
图 1.2 大黄素对细胞内端粒 G4 的影响A. 大黄素处理细胞 48 小时对端粒 G4 的影响，白色箭头代表端粒和 G4 的共定位。B. 大黄素处理后端粒 G4 的百分比，比例尺是 2 μm。*P<0.05，**P<0.01。1.3 讨论本实验通过对潜在的G4稳定性配体进行基于分子对接的虚拟筛选（SBVS），根据能量分析我们得到了六个化合物作为反平行和杂交型G4结构的配体。其中，大黄素是与这两种结构亲和力最强的化合物。分子对接可以通过优化打分函数和搜索算法实现最优化。各种各样的打分函数均有不足，故可以采用一致性打分：对多种打分函数进行整合进而对系统进行综合性评价。分子对接软件常见的有：AutoDock Vina[48]和 DOCK[49]等。就对接能力而言，AutoDock Vina 是较好的分子对接软件之一，AutoDock Vina 打分函数包括的主要内容有：空间相互作用项，氢键作用项和疏水相互作用项[50]。基于受体的虚拟筛选是基于受体的三维构象，借助分子对接将数据库内小分子配体与受体结合，再利用打分函数分析小分子配体与受体的亲和性，最后对所得结果排名筛选出潜在的小分子配体[51]。本实验就是利用 G4 三维构象为受体进行虚拟筛选。
22图 2.1 大黄素对 HeLa 细胞基因组 DNA 的短期影响A. 大黄素对细胞生长的影响；B. 大黄素对细胞形态的影响，比例尺是 50 μm；C. 大黄素对基因组 DNA 损伤的影响，免疫荧光检测 DNA 损伤标志蛋白 γ-H2AX，比例尺是 10 μm；D. DNA 损伤统计结果；E. 大黄素对凋亡的影响，比例尺是 20 μm；F.凋亡统计结果；G. 大黄素对衰老的影响；H. 衰老统计结果，比例尺是 20 μm。*P＜0.05，**P＜0.01，***P＜0.001。
本文编号：2956968
【文章来源】：天津医科大学天津市 211工程院校
【文章页数】：77 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
G4稳定性配体的虚拟筛选A.大黄素与杂交型G4结构的分子对接复合物；B.大黄素与反平行G4结构的分子对接复合物；C.圆二色光谱的热变性实验，解链温度（Tm）值反映了有无大黄素处理后G4的稳定性；D.紫外可见光谱的热变性实验，解链温度（Tm）值反映了有无大黄素
图 1.2 大黄素对细胞内端粒 G4 的影响A. 大黄素处理细胞 48 小时对端粒 G4 的影响，白色箭头代表端粒和 G4 的共定位。B. 大黄素处理后端粒 G4 的百分比，比例尺是 2 μm。*P<0.05，**P<0.01。1.3 讨论本实验通过对潜在的G4稳定性配体进行基于分子对接的虚拟筛选（SBVS），根据能量分析我们得到了六个化合物作为反平行和杂交型G4结构的配体。其中，大黄素是与这两种结构亲和力最强的化合物。分子对接可以通过优化打分函数和搜索算法实现最优化。各种各样的打分函数均有不足，故可以采用一致性打分：对多种打分函数进行整合进而对系统进行综合性评价。分子对接软件常见的有：AutoDock Vina[48]和 DOCK[49]等。就对接能力而言，AutoDock Vina 是较好的分子对接软件之一，AutoDock Vina 打分函数包括的主要内容有：空间相互作用项，氢键作用项和疏水相互作用项[50]。基于受体的虚拟筛选是基于受体的三维构象，借助分子对接将数据库内小分子配体与受体结合，再利用打分函数分析小分子配体与受体的亲和性，最后对所得结果排名筛选出潜在的小分子配体[51]。本实验就是利用 G4 三维构象为受体进行虚拟筛选。
22图 2.1 大黄素对 HeLa 细胞基因组 DNA 的短期影响A. 大黄素对细胞生长的影响；B. 大黄素对细胞形态的影响，比例尺是 50 μm；C. 大黄素对基因组 DNA 损伤的影响，免疫荧光检测 DNA 损伤标志蛋白 γ-H2AX，比例尺是 10 μm；D. DNA 损伤统计结果；E. 大黄素对凋亡的影响，比例尺是 20 μm；F.凋亡统计结果；G. 大黄素对衰老的影响；H. 衰老统计结果，比例尺是 20 μm。*P＜0.05，**P＜0.01，***P＜0.001。
本文编号：2956968
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