荧光定量PCR法测定地特胰岛素原料中酿酒酵母宿主DNA残留量

发布时间：2021-01-04 14:28

　　目的建立检测地特胰岛素原料中宿主DNA残留量的荧光定量核酸扩增（Real-time PCR）方法并进行验证,用于该产品的质量控制。方法选择酿酒酵母5s RNA作为靶基因设计引物,提取地特胰岛素原料中的残留宿主DNA,采用Real-time PCR SYBRGreen染料法对标准DNA和样品进行测定,绘制标准曲线并分析样品中的DNA残留量。对建立的方法进行方法学验证,并测定3批地特胰岛素原料中的残留宿主DNA。结果酿酒酵母基因组DNA质量浓度在0.18～180000ng/mL线性良好（r²=0.998 5）;回收率均在80.0%～106.3%,检测3批地特胰岛素原料的宿主DNA残留量均低于进口药品注册标准限度。结论该方法可用于酿酒酵母生产的地特胰岛素原料中残留宿主DNA的定量测定。 

【文章来源】：现代药物与临床. 2020年07期

【文章页数】：4 页

【部分图文】：

熔解曲线分析

【参考文献】：
期刊论文
[1]Real-time PCR法检测注射用门冬酰胺酶制剂中大肠杆菌核苷酸残留[J]. 孙允芳,谢育媛,郭江红.  药物分析杂志. 2017(02)
[2]甘精胰岛素对比地特胰岛素治疗2型糖尿病的Meta分析[J]. 范峥,郭桂明,李文喆,薛颖,王宏蕾,李璐暘,肖薇.  中国药房. 2016(18)
[3]荧光定量PCR法测定重组人干扰素α2b原液中宿主DNA的残留[J]. 苏喆,周朝东,黄哲甦,尉然.  中国生化药物杂志. 2016(04)
[4]地特胰岛素治疗儿童和青少年1型糖尿病的疗效观察[J]. 杨萍,魏祎,陈艳霞.  中华实用儿科临床杂志. 2014 (15)
[5]荧光定量PCR检测重组新蛭素中毕赤酵母基因组DNA的残留量[J]. 刘晶晶,郭莹莹,李艳琪,王文文,吴祖泽,靳继德.  生物技术通讯. 2014(03)
[6]应用SYBR GreenⅠ溶解曲线检测食源性单增李斯特菌[J]. 王昊宇,张公亮,侯红漫.  食品工业科技. 2013(10)
[7]中国仓鼠卵巢细胞DNA国家标准品的研制[J]. 王兰,高凯,范文红,毕华,付志浩,李永红,饶春明.  中国药学杂志. 2013(01)
[8]回到基础——地特胰岛素的安全性评价[J]. 陆菊明.  中国糖尿病杂志. 2012(08)
[9]关于生物制品残余DNA质量控制问题[J]. 王兰,王军志.  中国新药杂志. 2011(08)
[10]大量Pichia pastoris酵母基因组DNA的提取[J]. 刘晓志,高健,韩柱,王志明,陈伟斌.  生物技术通报. 2011(04)



本文编号：2956925