GLP-1类似物杂质研究
发布时间：2021-01-05 13:12
目的:对重组Arg34-GLP-1[7-37]生产制备过程中的潜在杂质进行分离纯化和结构确证。方法:将发酵后的料液进行高效液相色谱分析检测,利用离子交换色谱和制备液相纯化得到Arg34-GLP-1[7-37]纯品和杂质组分,将纯品进行高温、酸碱等不同条件下的破坏实验,来探知杂质产生机理,利用LC-MS、MALDI-TOF质谱、蛋白质全序列测序等方式推断杂质的分子量与结构。结果:经阴离子交换色谱及反相制备纯化后,Arg34-GLP-1[7-37]的纯度可达97.9%,杂质组分经LC-MS解析得到6个单体组分的分子量,分别为1033.1500,1302.8308,2743.9113,3381.4459,2488.5400,3108.8330,推测其可能结构序列。反相制备分离出三种主要杂质并将其纯化至91.4%、99.2%和96.7%。通过MALDI-TOF测得其[M+H]+分子量分别为1033.5446,2744.2397和3112.4475,根据Arg34-GLP-1[7-37]...
【文章来源】：成都大学四川省
【文章页数】：85 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
氨基酸侧链反应产生杂质Figure1.1Aminoacidsidechainreactionproducesimpurities
GLP-1类似物杂质研究5（4）旋光色散（ORD），旋光色散（ORD）测量样品根据波长旋转线性偏振光的能力。这种与CD密切相关的技术在过去非常流行用于肽和蛋白质的构象分析，但现在有了更先进的技术，如CD。振动圆二色（VCD）可以看作是CD和IR方法的组合，利用CD的带形变化和IR的频率分辨率。该技术可用于肽和蛋白质的定量和定性分析。或者也可以使用二维IR（2D-IR）[36]。1.6本课题的研究技术路线本研究的技术路线如图1.2。图1.2本课题的研究技术路线Figure1.2Researchtechnologyrouteofthistopic
GLP-1类似物杂质研究13图2.2重组Arg34-GLP-1[7-37]粗品HPLC图谱Fig.2.2HPLCchromatogramofcrudeArg34-GLP-1[7-37]经高效液相色谱分析检测，粗品多肽的纯度为58.9%，检测到的杂质峰数目为17个，疏水性杂质含量较高。2.5小结本章通过文献调研确定了四种重组Arg34-GLP-1[7-37]的HPLC分析方法，将其进行筛选并优化后作为初步检测方法。筛选了不同规格及性质的色谱柱，确定了色谱柱规格及粒径，然后以相同规格的15根不同的色谱柱为对象，以目标物面积、纯度、峰个数、分离度区间0<R<1峰个数和分离度区间1≤R峰个数为5个评价指标，依据HPLC检测结果，运用熵权法进行分析，计算出了每根色谱柱的综合评价值，最终选择SWELL-Ultimate-XB-C4的色谱柱，并进一步优化方法确定了重组Arg34-GLP-1[7-37]的HPLC分析方法，检测获得了重组多肽Arg34-GLP-1[7-37]粗品的HPLC图谱，获知了粗品纯度及杂质数目。
【参考文献】：
期刊论文
[1]超高效液相色谱-串联质谱法测定猪肉中巴氯芬的残留[J]. 严凤,潘娟,贡松松,胡申玥,张婧,吴剑平,黄士新. 食品安全质量检测学报. 2019(11)
[2]胰岛素和GLP-1类似物长效化策略研究的最新进展[J]. 李承业,黄文龙,钱海. 中国药科大学学报. 2018(06)
[3]GLP-1融合蛋白的表达、纯化及其初步活性分析（英文）[J]. 姜旖旎,黄宗庆,马洁,冯军. 中国医药工业杂志. 2018(11)
[4]高效液相色谱法测定扎那米韦鼻用粉雾剂含量和相关杂质的研究[J]. 井绪文,吴优,李柏林,陈顺,王泽人. 中国新药杂志. 2018(20)
[5]GLP-1对胆固醇流出的影响[J]. 李娆,朱利勇,李伟正,嵇光年,邱先杰,朱晒红. 中华肥胖与代谢病电子杂志. 2018(03)
[6]胰高血糖素样肽-1及其相关药物与神经保护[J]. 刘玉琴,刘元涛. 青岛大学学报(医学版). 2018(04)
[7]GLP-1-IgG4-Fc融合蛋白的表达与鉴定[J]. 陈英,肖海鹏,张晓焰,龚庆伟,马利,李文佳,陈小锋. 中国生物工程杂志. 2018(07)
[8]GLP-1受体激动剂对2型糖尿病患者骨折风险影响的Meta分析[J]. 张岩松,王可可,刘力嘉,赵春阳,姜明燕. 中国骨质疏松杂志. 2018(07)
[9]合成多肽药物质控及杂质谱研究[J]. 胡玉玺,蒋煜,韩天娇,何驰宇. 中国新药杂志. 2018(05)
[10]GLP-1-Fc融合蛋白在DG44细胞中的表达及其质量分析[J]. 骆海燕,谭婉珑,张亚楠,洪厚胜. 南京工业大学学报(自然科学版). 2017(06)
硕士论文
[1]鲑降钙素及其制剂的杂质研究和质量分析[D]. 田文静.中国食品药品检定研究院 2013
[2]胰高血糖素样肽-1受体激动剂对糖耐量减低大鼠胰岛α细胞作用的研究[D]. 辛欢欢.山西医科大学 2012
本文编号：2958725
【文章来源】：成都大学四川省
【文章页数】：85 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
氨基酸侧链反应产生杂质Figure1.1Aminoacidsidechainreactionproducesimpurities
GLP-1类似物杂质研究5（4）旋光色散（ORD），旋光色散（ORD）测量样品根据波长旋转线性偏振光的能力。这种与CD密切相关的技术在过去非常流行用于肽和蛋白质的构象分析，但现在有了更先进的技术，如CD。振动圆二色（VCD）可以看作是CD和IR方法的组合，利用CD的带形变化和IR的频率分辨率。该技术可用于肽和蛋白质的定量和定性分析。或者也可以使用二维IR（2D-IR）[36]。1.6本课题的研究技术路线本研究的技术路线如图1.2。图1.2本课题的研究技术路线Figure1.2Researchtechnologyrouteofthistopic
GLP-1类似物杂质研究13图2.2重组Arg34-GLP-1[7-37]粗品HPLC图谱Fig.2.2HPLCchromatogramofcrudeArg34-GLP-1[7-37]经高效液相色谱分析检测，粗品多肽的纯度为58.9%，检测到的杂质峰数目为17个，疏水性杂质含量较高。2.5小结本章通过文献调研确定了四种重组Arg34-GLP-1[7-37]的HPLC分析方法，将其进行筛选并优化后作为初步检测方法。筛选了不同规格及性质的色谱柱，确定了色谱柱规格及粒径，然后以相同规格的15根不同的色谱柱为对象，以目标物面积、纯度、峰个数、分离度区间0<R<1峰个数和分离度区间1≤R峰个数为5个评价指标，依据HPLC检测结果，运用熵权法进行分析，计算出了每根色谱柱的综合评价值，最终选择SWELL-Ultimate-XB-C4的色谱柱，并进一步优化方法确定了重组Arg34-GLP-1[7-37]的HPLC分析方法，检测获得了重组多肽Arg34-GLP-1[7-37]粗品的HPLC图谱，获知了粗品纯度及杂质数目。
【参考文献】：
期刊论文
[1]超高效液相色谱-串联质谱法测定猪肉中巴氯芬的残留[J]. 严凤,潘娟,贡松松,胡申玥,张婧,吴剑平,黄士新. 食品安全质量检测学报. 2019(11)
[2]胰岛素和GLP-1类似物长效化策略研究的最新进展[J]. 李承业,黄文龙,钱海. 中国药科大学学报. 2018(06)
[3]GLP-1融合蛋白的表达、纯化及其初步活性分析（英文）[J]. 姜旖旎,黄宗庆,马洁,冯军. 中国医药工业杂志. 2018(11)
[4]高效液相色谱法测定扎那米韦鼻用粉雾剂含量和相关杂质的研究[J]. 井绪文,吴优,李柏林,陈顺,王泽人. 中国新药杂志. 2018(20)
[5]GLP-1对胆固醇流出的影响[J]. 李娆,朱利勇,李伟正,嵇光年,邱先杰,朱晒红. 中华肥胖与代谢病电子杂志. 2018(03)
[6]胰高血糖素样肽-1及其相关药物与神经保护[J]. 刘玉琴,刘元涛. 青岛大学学报(医学版). 2018(04)
[7]GLP-1-IgG4-Fc融合蛋白的表达与鉴定[J]. 陈英,肖海鹏,张晓焰,龚庆伟,马利,李文佳,陈小锋. 中国生物工程杂志. 2018(07)
[8]GLP-1受体激动剂对2型糖尿病患者骨折风险影响的Meta分析[J]. 张岩松,王可可,刘力嘉,赵春阳,姜明燕. 中国骨质疏松杂志. 2018(07)
[9]合成多肽药物质控及杂质谱研究[J]. 胡玉玺,蒋煜,韩天娇,何驰宇. 中国新药杂志. 2018(05)
[10]GLP-1-Fc融合蛋白在DG44细胞中的表达及其质量分析[J]. 骆海燕,谭婉珑,张亚楠,洪厚胜. 南京工业大学学报(自然科学版). 2017(06)
硕士论文
[1]鲑降钙素及其制剂的杂质研究和质量分析[D]. 田文静.中国食品药品检定研究院 2013
[2]胰高血糖素样肽-1受体激动剂对糖耐量减低大鼠胰岛α细胞作用的研究[D]. 辛欢欢.山西医科大学 2012
本文编号：2958725
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