NF-κB信号转导通路在PAH形成过程中的实验研究

发布时间：2017-04-10 15:23

  本文关键词：NF-κB信号转导通路在PAH形成过程中的实验研究，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：目的:通过野百合碱诱导大鼠肺动脉高压模型的制备动态检测NF-кB信号转导通路中NF-кBp65、炎性因子(VEGF、IL-8、TGF-β)的表达情况以及与肺动脉压力间关系的分析,同时观察肺血管形态、计算右室肥厚指数(右室/(左室+室间隔))重量的比值。探讨信号转导通路在肺动脉高压形成过程中的变化及其意义,旨在通过干预信号转导通路作为治疗肺动脉高压一种新的手段。方法:1、模型建立与分组:采用腹腔注射野百合碱(MCT)建立肺动脉高压模型;将成年健康SD大鼠48只,随机分为2组:(1)野百合碱(MCT)组(n=24),腹腔一次性注射野百合碱;(2)正常对照组(n=24),以相同剂量等张生理盐水腹腔一次性注射。在第7、14、21、28天分别取6只大鼠采用右心导管术测得肺动脉压力后处死大鼠。2、标本制备及观察指标:(1)测得肺动脉压力:将导管连接生物压力感受器,观察压力波型,稳定后测取肺动脉压力(m PAP);(2)测得心肌肥厚程度:大鼠处死后取心脏组织,分别称取心脏右室及左室+室间隔重量,计算右室肥大的指标:右室肥厚指数,即右室/(左室+室间隔)(RV/(LV+s))比值;(3)其余各项具体指标:处死大鼠后用无菌注射器从腹主动脉取血,离心后存于EP管中备用,应用ELASE法测得血液TGF-β、IL-8、VEGF因子浓度;后再取肺组织,做成病理切片行HE染色观察肺组织、血管形态及采用免疫组化标记测得NF-кBp65蛋白含量。结果:1、大鼠一般情况注射后MCT大鼠一般情况欠佳,表现为活动量显著减少,毛发松动,灰暗,无光泽,进食减少,逐渐消瘦。到28天,MCT组大鼠出现体重减轻,呼吸困难,部分大鼠腹水形成,甚至出现右心室壁增厚和一系列心脏衰竭的现象。在这种情况下,实验组大鼠右心室出现肥大,肺血管阻力增加,表明肺动脉高压模型成功制备;大鼠存活情况:在整个实验过程中,对照组中所有大鼠均存活(24只),而MCT组大鼠实验组样本数根据预实验结果(死亡率较高)实际增大为32只,共死亡7只,剩余25只。2、大鼠肺动脉压力及肺组织病理改变根据生物转换器上显示的压力波形,可以看到肺动脉压力在MCT组比对照组显著较高,差异有统计学意义;大体病理:正常组大鼠肺组织无出血,瘀点,瘀斑现象,色泽淡红色;MCT组大鼠肺组织逐渐变得苍白,并可见不同程度的瘀点,瘀斑,随着时间的推移病变程度越明显;光镜(×200)下:在显微镜下,对照组和预想的几乎差不多,肺组织、支气管等结构和形态无明显改变,即结构清晰完整,形态正常;无管壁增厚,无渗出;而MCT组大鼠在7天时可观察到肺组织结构较清晰,支气管形态无明显改变,但肺动脉管壁略微增厚,其周少量炎性细胞浸润,部分出现缺失或者融合;MCT组14天时肺动脉管壁增厚,且周围出现较多炎性细胞浸润;MCT组21天时出现肺组织结构破坏较前严重,肺小动脉广泛增粗增厚,部分中动脉出现明显增厚,管腔狭窄,MCT组28天时则为支气管及血管周围有大量炎性细胞浸润,部分中动脉内皮几乎完全看不到,出现脱落坏死,管腔狭窄,甚至部分管腔消失,出现严重的纤维化改变。3、各组炎性因子水平的改变与对照组比较,MCT组大鼠TGF、IL-8、VEGF因子浓度均明显升高,且随着时间的延长、病情的加重呈上升趋势,二者差异有统计学意义(P0.05);4、各组大鼠心肌肥厚程度改变MCT组大鼠心肌出现肥大增厚,以右心室更明显,右室肥厚指数是心室肥大最具代表性的指标,亦明显升高,且较正常组差异有统计学意义(P0.05);5、各组大鼠NF-кBp65m RNA蛋白表达含量改变MCT组大鼠NF-кBp65m RNA蛋白含量比对照组升高,时间越长,升高的越明显,二者比较,差异有统计学意义(P0.05);6、各组炎性因子与肺动脉压力间的关系分别以实验组大鼠各炎性因子(TGF、IL-8、VEGF)浓度为纵坐标,肺动脉压力为横坐标,绘制散点图,并计算相关系数r值,因此,这一结果提示,炎性因子与肺动脉压力之间存在高度密切的正相关关系;结论:1.应用野百合碱诱导建立肺动脉高压模型,方法简单且容易操作;2.MCT组大鼠肺组织中IL-8、TGF-β1、VEGF较对照组大鼠表达显著升高,差异有统计学意义;提示炎症因子参与肺动脉高压的形成、发展过程;3.肺动脉高压模型中的NF-K Bp56的表达明显增加且与肺动脉压成正相关。推测NF-K B信号通路参与肺动脉高压的形成。通过调控NF-K B信号通路可作为治疗PAH一种潜在的治疗手段。
【关键词】：野百合碱 肺动脉高压 炎性因子 信号转导通路 NF-кβp65
【学位授予单位】：皖南医学院
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R965
【目录】：

• 摘要7-10
• Abstract10-14
• 前言14-17
• 研究材料（资料、内容）与方法17-29
• 1 实验材料17-18
• 2 实验内容与方法18-28
• 3 统计学分析28-29
• 结果29-39
• 讨论39-44
• 结论44-45
• 参考文献45-50
• 综述50-67
• 参考文献64-67
• 作者简介及读研期间主要科研成果67-68
• 致谢68

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本文编号：296998