人源LXRα的酵母重组表达与纯化及活性鉴定

发布时间：2017-04-10 13:19

  本文关键词：人源LXRα的酵母重组表达与纯化及活性鉴定，，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：目的:通过对人源LXRα基因进行毕赤酵母系统重组表达,研究LXRα与相关配体的生物结合活性,为今后靶向药物设计奠定基础。方法:以THP-1细胞提取总RNA后,再通过PCR扩增得到LXRα基因,构建pPICZαA-LXRα表达载体,并电转化至毕赤酵母X-33。经甲醇诱导表达,镍离子亲和层析柱纯化获得重组蛋白,采用ELISA方法鉴定了重组蛋白的活性与功能。结果:LXRα基因片段成功克隆至表达载体pPICZαA,通过毕赤酵母X-33的甲醇诱导及镍离子亲和层析纯化得到P.rLXRα蛋白。ELISA实验结果显示P.rLXRα能够很好的与羟基胆固醇结合。结论:成功构建了pPICZαA-LXRα表达载体,并在毕赤酵母表达系统中实现了分泌表达,表达纯化的LXRα重组蛋白具有良好的结合羟基胆固醇活性,为今后靶向药物设计奠定基础。
【关键词】：动脉粥样硬化 LXRα 酵母重组表达
【学位授予单位】：吉林大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：Q78;R91
【目录】：

• 摘要4-5
• Abstract5-8
• 第一章 前言8-22
• 1.1 动脉粥样硬化治病机制8-12
• 1.1.1 炎症细胞与动脉粥样硬化8-10
• 1.1.2 血管壁细胞与动脉粥样硬化10-12
• 1.2 动脉粥样硬化治疗策略12-14
• 1.3 胆固醇逆转运的研究现状14-15
• 1.4 ABCA1研究进展15-19
• 1.4.1 ABCA1的结构和功能15-17
• 1.4.2 ABCA1的表达调节17-18
• 1.4.3 ABCA1的功能18-19
• 1.5 LXRΑ研究进展19-21
• 1.5.1 LXRs ( Liver X Receptor a/β)概述19-20
• 1.5.2 LXRα的功能与调控20-21
• 1.6 结束语21-22
• 第二章 实验材料与方法22-35
• 2.1 仪器22
• 2.2 试剂与配制22-23
• 2.3 实验方法23-35
• 2.3.1 细胞复苏培养及冻存23-24
• 2.3.2 基因调取24-25
• 2.3.3 LXRα酵母表达载体的构建25-30
• 2.3.4 LXRα酵母表达菌的构建30-32
• 2.3.5 目的蛋白的诱导表达及纯化32-33
• 2.3.6 ELISA法鉴定P.r LXRα重组蛋白生物学活性33-35
• 第三章 结果与讨论35-41
• 3.1 总RNA纯度分析35
• 3.2 LXRΑ基因片段的获得35-36
• 3.3 PCR及双酶切方法鉴定目的基因与T载体连接情况36-37
• 3.4 重组T载体测序鉴定37
• 3.5 PCR及双酶切鉴定目的基因与PPICZΑA表达载体连接情况37
• 3.6 原位双膜法快速筛选阳性表达菌株37-38
• 3.7 P.RLXRΑ重组蛋白在毕赤酵母X-33 中的诱导表达及纯化38-39
• 3.8 ELISA方法检测P.RLXRΑ蛋白与羟基胆固醇的结合活性39-40
• 3.9 结论40-41
• 参考文献41-45
• 论文作者简历45-46
• 致谢46

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本文编号：296801