MiR-365在二甲双胍介导的胃癌细胞凋亡的作用机制研究

发布时间：2021-01-12 02:25

　　目的:二甲双胍主要作为治疗二型糖尿病的胍类药物在临床上的使用已超过三十多年,近年来二甲双胍可调控癌症的现象已经被提出。然而,二甲双胍参与癌细胞调控的分子机制尚不十分明确,其中与失调的microRNAs有直接的相关性。肿瘤细胞在能量代谢方面与健康细胞有所不同,而AMPK不仅对能量转换有关,还对肿瘤细胞的凋亡至关重要。总之,我们确立了二甲双胍与miR-365/PTEN/AMPK信号通路在胃癌细胞凋亡中的作用,为胃癌的诊断治疗提供新的思路。方法:取对数生长期的人胃癌细胞AGS、MGC-803、SGC-7901接种于培养板中,用不同浓度二甲双胍（1、1.5、3、4.5、6 mM）分别干预24、48、72小时,含等量无菌水培养基处理为对照组,CCK-8和EdU试剂盒检测胃癌细胞的增殖且计算二甲双胍对胃癌细胞的IC50值为5 mmol/L;用5 mmol/L二甲双胍干预三种胃癌细胞24、48、72小时,Western Blot检测凋亡相关蛋白Caspase-3、BAX、BCL-2和细胞色素C的表达水平并计算BAX/BCL-2比值,流式细胞仪检测细胞的凋亡情况;用二甲双胍作用癌细胞不同时间和浓度检测... 

【文章来源】：武汉科技大学湖北省

【文章页数】：65 页

【学位级别】：硕士

【文章目录】：
摘要
Abstract
第1章 前言
第2章 实验材料与方法
    2.1 实验材料
        2.1.1 实验细胞系和菌种
        2.1.2 实验组织样品
    2.2 实验试剂
        2.2.1 培养细胞所需试剂及配制方法
        2.2.2 提取质粒所需相关试剂
        2.2.3 Western bloting相关试剂
        2.2.4 提取RNA及 RT-PCR相关试剂
    2.3 实验仪器与设备
    2.4 实验方法
        2.4.1 细胞培养
        2.4.2 CCK-8细胞增殖试验
        2.4.3 转化
        2.4.4 小提质粒
        2.4.5 中提质粒
        2.4.6 寡核苷酸及siRNA设计和瞬时转染
        2.4.7 EdU（5-乙炔基-2’-脱氧尿苷）细胞增殖测定
        2.4.8 流式细胞仪检测细胞凋亡
        2.4.9 RNA提取及实时荧光定量PCR（q RT-PCR）
        2.4.10 蛋白质印迹分析（Western Blot）
        2.4.11 细胞免疫荧光（IF）
        2.4.12 荧光素酶报告基因测定（Luciferase）
        2.4.13 慢病毒包装
        2.4.14 Caspas-3 酶联免疫分析（ELISA）
        2.4.15 H&E染色
        2.4.16 组织切片的免疫组化（IHC）
        2.4.17 组织切片的TUNEL
        2.4.18 裸鼠成瘤
第3章 实验结果
    3.1 二甲双胍抑制胃癌细胞的活力和增殖
    3.2 二甲双胍诱导胃癌细胞凋亡
    3.3 二甲双胍上调miR-365表达
    3.4 MiR-365诱导胃癌细胞凋亡
    3.5 MiR-365和二甲双胍协同上调胃癌细胞凋亡
    3.6 Mi R-365 靶向PTEN调控表达
    3.7 二甲双胍调节AMPK表达及定位
    3.8 PTEN影响AMPK的磷酸化诱导细胞凋亡
    3.9 二甲双胍和miR-365抑制裸鼠肿瘤组织生长
第4章 结论
第5章 讨论与展望
致谢
参考文献
附录1 攻读硕士学位期间发表的论文
附录2 攻读硕士学位期间参加的科研项目



本文编号：2971952