重组脂连蛋白通过非AMPK依赖的蛋白激酶C途径抑制小鼠星形胶质细胞炎症相关蛋白表达

发布时间：2021-01-17 04:24

　　目的探讨重组脂连蛋白（APN）是否通过蛋白激酶C（PKC）及AMP活化蛋白激酶（AMPK）途径在小鼠星形胶质细胞氧糖剥夺/复氧（OGD/R）模型中发挥抗炎作用。方法 MA1800小鼠星形胶质细胞分别采用氧糖剥夺（OGD） 2、 4、 6、 8、 12、 24 h及（20、 50、 100、 200、 400、 600、 800、 1000、 1200、 1600、 2000）μmol/L氯化钴（CoCl₂）进行OGD/R处理,采用Western blot法检测PKC、 AMPK的磷酸化水平,确定后续实验中OGD/R处理条件。将细胞分为正常对照组、 OGD/R处理组、单纯APN处理组、 OGD/R联合APN处理组、 AMPK抑制剂联合OGD/R和APN处理组。采用Western blot法检测PKCα、磷酸化的广谱PKC[p-PKC （pan）]、 AMPKα、磷酸化的AMPKα（p-AMPKα）以及含pyrin结构域NOD样受体家族3（NLRP3）炎性体和细胞培养液上清液中肿瘤坏死因子α（TNF-α）水平。结果在OGD处理6 h后复氧以及OGD处理中CoCl

【文章来源】：细胞与分子免疫学杂志. 2020,36(07)北大核心

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【部分图文】：

Western blot法检测MA1800细胞PKC和AMPK磷酸化水平

采用Western blot法检测正常培养组、 OGD/R组、 单纯APN组、 APN联合OGD/R组MA1800星形胶质细胞中AMPK、 PKC磷酸化水平。结果显示, OGD/R组细胞中AMPK、 PKC的磷酸化水平显著高于正常培养组(P<0.01, 图2); 与OGD/R组相比, APN联合OGD/R组细胞中PKC的磷酸化水平下降(P<0.05, 图2), 但AMPK磷酸化无明显变化, 提示APN可以抑制OGD/R引起的PKC磷酸化, 但不影响OGD/R引起的AMPK磷酸化。2.3 APN处理降低星形胶质细胞NLRP3炎性体和细胞培养液上清液中TNF-α水平

采用Western blot法检测MA1800星形胶质细胞中NLRP3炎性体的表达, 以及细胞培养液上清液中TNF-α的分泌水平。结果显示, 与正常培养组相比, OGD/R组细胞的NLRP3水平及上清液中的TNF-α水平明显上升(P<0.01, 图3); 与OGD/R组相比, APN联合OGD/R处理组细胞的NLRP3水平及上清液中的TNF-α水平均较低(P<0.05, 图3), 提示APN对星形胶质细胞炎症反应具有抑制效应。2.4 AMPK不参与APN对PKC磷酸化及炎症因子的抑制作用


本文编号：2982201