肝细胞肝癌治疗新靶点的筛选及相关靶向抗肿瘤活性多肽偶联药物的设计

发布时间：2021-01-19 12:07

　　目的:肝细胞肝癌（Hepatocellular carcinoma,HCC）是世界范围内死亡率较高的恶性肿瘤之一,且其发病率高约占全部原发性肝癌病例的70%～85%。HCC主要的治疗方案包括手术治疗、放射治疗和药物治疗,其中手术治疗是首选方案。但是由于HCC病程早期无明显症状,50%以上患者诊断时已超出手术最佳时期。因此靶向药物治疗、介入治疗、放射治疗在更好的控制和治疗HCC中也十分重要。HCC的发生经历了细胞内信号通路的改变、肿瘤增殖代谢系统的改变以及局部肿瘤微环境的形成等极其复杂的多个过程。基于HCC发生和发展中基因表达谱的变化以及细胞内信号通路的改变等进行研究,可以筛选出潜在的治疗新靶点。而利用筛选得到的HCC治疗靶点的蛋白晶体结构,就可以进行靶向药物的设计。利用药物受体学说,可以基于靶点蛋白或其配体的3D结构设计出相应的靶向药物。以配体的肽模拟物为先导物,利用计算机模拟设计技术对其进行合理的结构改造,可以获得与特定蛋白亲和的多肽偶联药物。对此多肽偶联药物进行合成路线设计后,通过化学合成即可获得目标肽类化合物。本研究旨在筛选HCC潜在的治疗靶点,并进一步设计能与此靶点结合的靶向肽... 

【文章来源】：中国医科大学辽宁省

【文章页数】：109 页

【学位级别】：博士

【文章目录】：
摘要
Abstract
英文缩略语
第一部分:基于生物信息大数据分析筛选肝细胞肝癌治疗新靶点
    1 前言
    2 材料与方法
        2.1 实验材料与仪器
            2.1.1 组织样本来源
            2.1.2 主要材料及试剂
            2.1.3 主要实验仪器
        2.2 实验方法
            2.2.1 TCGA数据库肝癌转录组表达谱数据获取
            2.2.2 差异表达基因筛选
            2.2.3 基因本体论分析
            2.2.4 构建蛋白-蛋白相互作用网络
            2.2.5 Kaplan-Meier生存分析及Cox回归分析
            2.2.6 免疫组化相关试剂配制
            2.2.7 免疫组织化学染色试验（IHC）
            2.2.8 基因集富集分析（GSEA）
            2.2.9 统计分析
    3 结果
        3.1 肝细胞肝癌差异表达基因筛选及功能注释分析结果
        3.2 候选靶点基因筛选策略及蛋白-蛋白相互作用网络的构建
        3.3 肝细胞肝癌患者的临床病理特征
        3.4 候选靶点基因表达水平与肝细胞肝癌患者不良预后的关系
        3.5 候选靶点基因的肿瘤表达谱
        3.6 CTAG2和PRSS3 的表达情况与临床病理参数的相关性
            3.6.1 CTAG2的表达情况与临床病理参数的相关性
            3.6.2 PRSS3的表达情况与临床病理参数的相关性
        3.7 CTAG2和PRSS3 相关KEGG信号通路和调控分子分析
            3.7.1 关于CTAG2的基因集富集分析及调控分子
            3.7.2 关于PRSS3的基因集富集分析及调控分子
    4 讨论
第二部分:靶向PRSS3的多肽偶联药物设计及活性研究
    1 前言
    2 材料和方法
        2.1 材料与试剂
            2.1.1 细胞来源
            2.1.2 主要实验试剂
            2.1.3 实验仪器
        2.2 实验方法
            2.2.1 基于MOE软件的分子对接（Docking）
            2.2.2 标准曲线的测定
            2.2.3 Fmoc-Ile-Wang树脂替代度的测定
            2.2.4 靶向PRSS3 的多肽WZ-1 的合成方法
            2.2.5 多肽WZ-1偶联连接臂的合成方法
            2.2.6 多肽WZ-1偶联苯丁酸氮芥的合成方法
            2.2.7 多肽偶联苯丁酸氮芥的纯化方法
            2.2.8 含量分析方法验证
            2.2.9 细胞培养
            2.2.10 基于四唑盐比色法的细胞毒性实验（MTT）
    3 结果
        3.1 基于PRSS3蛋白晶体结构设计的亲和多肽
            3.1.1 PRSS3与其蛋白抑制剂结构细化及相互作用位点
            3.1.2 亲和多肽设计与分子对接
        3.2 多肽WZ-1偶联药物的合成路线设计
            3.2.1 多肽WZ-1的合成路线设计
            3.2.2 多肽WZ-1偶联苯丁酸氮芥的合成路线设计
        3.3 多肽WZ-1偶联药物的合成
            3.3.1 氨基酸缩合反应研究
            3.3.2 氨基酸树脂替代度的研究
            3.3.3 关键中间体的合成
            3.3.4 多肽WZ-1偶联苯丁酸氮芥的合成
        3.4 相关化合物的表征
            3.4.1 关键中间体的质谱
            3.4.2 多肽WZ-1偶联苯丁酸氮芥的表征
        3.5 多肽WZ-1偶联苯丁酸氮芥含量方法学验证
            3.5.1 线性与范围
            3.5.2 溶液稳定性
            3.5.3 精密度
        3.6 多肽WZ-1偶联苯丁酸氮芥的细胞毒性效果
    4 讨论
结论
本研究创新性的自我评价
参考文献
综述
    参考文献
攻读学位期间取得的研究成果
致谢
个人简历


【参考文献】：
期刊论文
[1]2012—2017年美国食品和药物管理局批准的抗肿瘤新药研发概况[J]. 王传权.  中国新药与临床杂志. 2018(06)
[2]Cancer incidence and mortality in China, 2014[J]. Wanqing Chen,Kexin Sun,Rongshou Zheng,Hongmei Zeng,Siwei Zhang,Changfa Xia,Zhixun Yang,He Li,Xiaonong Zou,Jie He.  Chinese Journal of Cancer Research. 2018(01)
[3]Hepatocellular carcinoma in the elderly:Meta-analysis and systematic literature review[J]. Annie K Hung,Jennifer Guy.  World Journal of Gastroenterology. 2015(42)
[4]多肽偶联药物的研究进展[J]. 夏江华,冯军.  世界临床药物. 2014(09)
[5]抗肿瘤药NGR-hTNF[J]. 邢爱敏.  药学进展. 2011(11)

硕士论文
[1]基于多肽偶联技术的新型抗肿瘤药物的设计与研究[D]. 何自浩.华中科技大学 2016



本文编号：2986958