咖啡因协同促进5-氟尿嘧啶的抗肝癌作用及机制研究
发布时间：2021-01-21 04:53
【背景】原发性肝细胞癌是全球普遍存在的恶性肿瘤,因其起病急、诊断率低,手术治疗有极大的局限性。药物治疗是肝癌晚期患者治疗的主要手段,临床各项研究表明多药物的联合治疗对肝癌具有一定的疗效。5-氟尿嘧啶是一种经典的抗癌药物,然而临床应用发现其存在耐药性和细胞毒性等问题,使得其抗癌功效有限。近年来,5-FU（5-fluorouracil）与其他药物联合使用已被广泛用于各种癌症的临床治疗。咖啡因是一种结构明确,作用广泛的甲基黄嘌呤类精神药物,近年来越来越多的报道表明,咖啡因除了传统意义上的致兴奋作用,还能降低各类癌症的风险,如胶质母细胞瘤、结肠直肠癌、肝癌等。有研究表明,咖啡因联合顺铂及阿糖胞苷不仅能显著抑制裸鼠皮下成瘤模型中胰腺肿瘤的生长,还能增加顺铂对肝癌细胞的抑增殖和促凋亡作用,该实验证实咖啡因可以通过促进肿瘤对化疗药物的敏感性而改善患者的耐受性、延长生存期。以上研究为5-FU和咖啡因的新组合提供了理论依据。因此,我们研究5-FU和咖啡因联合应用协同抗肝癌作用和机制。【目的】探讨咖啡因和5-氟尿嘧啶联合应用的抗肝癌作用及分子机制。【研究方法】1.MTS实验检测咖啡因和5-FU单独处理对肝...
【文章来源】：广州医科大学广东省
【文章页数】：61 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
FU和咖啡因对SMMC-7721、Hep3B的生长抑制率曲线和IC50（A）不同浓度的咖啡因作用细胞48h后采用MTS法检测细胞活性；咖啡因剂量依赖性地抑制肝癌细胞SMMC-7721、Hep3B的活性
广州医科大学硕士学位论文24(A)Aftertreatmentwithdifferentconcentrationsofcaffeinefor48h,theviabilityofcellswereassessedbyMTSassay.Caffeinedose-dependentlyinhibitstheactivityofhepatomacellsSMMC-7721andHep3B.(B)Aftertreatmentwithdifferentconcentrationsof5-FUfor48h,theviabilityofcellswereassessedbyMTSassay.5-FUdose-dependentlyinhibitstheactivityofhepatomacellsSMMC-7721andHep3B.2.咖啡因协同5-FU增强对肝癌细胞的抑增殖作用为了探讨咖啡因对5-FU的协同作用，我们单独或联合使用不同浓度的咖啡因（0，0.5，1mM）和5-FU（0，25，50μM）处理肝癌细胞48h后，采用MTS法检测咖啡因和5-FU联合使用及单独使用对肝癌细胞活性的影响。根据OD值绘制柱状图和计算联合指数CI值。MTS结果显示，与单独使用咖啡因或5-FU相比，咖啡因（0.5mM，1mM）和5-FU（25，50μM）联合治疗抑制肝癌的增殖作用更强（图2-A,C）。咖啡因和5-FU联合组的联合指数（CI）值小于1（图2B，D）。这些结果表明，在SMMC-7721和Hep3B细胞中，咖啡因（0，0.5，1mM）和5-FU（0，25，50μM）之间存在协同作用。图2咖啡因联合5-FU对SMMC-7721、Hep3B增殖的影响（A）咖啡因（0.5，1mM）剂量依赖地增强5-FU（0，25，50μM）对肝癌细胞SMMC-7721的抑增殖作用。（B）根据不同浓度咖啡因联合5-FU用药后对肝癌细胞SMMC-7721增殖的抑制情况，计算CI值并绘制点状图。（C）咖啡因（0.5，1mM）剂量依赖地增强5-FU（0，25，
广州医科大学硕士学位论文26图3咖啡因联合5-FU对肝癌细胞凋亡蛋白的影响（A）咖啡因（0，0.5，1mM）和5-FU（0，25，50μM）处理SMMC-7721后，通过WesternBlot检测PARP，Bcl-2和Bcl-xL的表达。（B）咖啡因（0，0.5，1mM）和5-FU（0，25，50μM）处理Hep3B后，通过WesternBlot检测PARP，Bcl-2和Bcl-xL的表达。Figure3Effectofcaffeinecombinedwith5-FUonapoptoticproteinsoflivercancercells（A）AftertreatmentwithCaffeine(0,0.5,1mM)and5-FU(0,25,50μM)inSMMC-7721,theexpressionofPARP,Bcl-2andBcl-xLweredetectedbywesternBlot.（B）AftertreatmentwithCaffeine(0,0.5,1mM)and5-FU(0,25,50μM)inHep3B,theexpressionofPARP,Bcl-2andBcl-xLweredetectedbywesternBlot.4.5-FU联合咖啡因明显抑制肝癌细胞的增殖为了进一步验证咖啡因联合5-FU共同作用后对肝癌细胞增殖作用的影响，我们选取25μM5-FU与1mM咖啡因检测肝癌细胞活性。25μM5-FU和1mM咖啡因联合处理两种肝癌细胞株24h、48h、72h，采用MTS实验方法检测肝癌细胞活性，根据OD值绘制柱状图，结果显示，随着药物处理时间的延长，咖啡因与5-FU联合作用对肝癌细胞抑增殖作用更加明显（图4A，B）。接着，我们采用结晶紫染色法观察药物联合作用后细胞的增殖情况，结果发现，与单药组相比，联合组细胞数量明显减少，均有统计学差异。Hep3B有相似的现象（图4C，D）。另外，
本文编号：2990495
【文章来源】：广州医科大学广东省
【文章页数】：61 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
FU和咖啡因对SMMC-7721、Hep3B的生长抑制率曲线和IC50（A）不同浓度的咖啡因作用细胞48h后采用MTS法检测细胞活性；咖啡因剂量依赖性地抑制肝癌细胞SMMC-7721、Hep3B的活性
广州医科大学硕士学位论文24(A)Aftertreatmentwithdifferentconcentrationsofcaffeinefor48h,theviabilityofcellswereassessedbyMTSassay.Caffeinedose-dependentlyinhibitstheactivityofhepatomacellsSMMC-7721andHep3B.(B)Aftertreatmentwithdifferentconcentrationsof5-FUfor48h,theviabilityofcellswereassessedbyMTSassay.5-FUdose-dependentlyinhibitstheactivityofhepatomacellsSMMC-7721andHep3B.2.咖啡因协同5-FU增强对肝癌细胞的抑增殖作用为了探讨咖啡因对5-FU的协同作用，我们单独或联合使用不同浓度的咖啡因（0，0.5，1mM）和5-FU（0，25，50μM）处理肝癌细胞48h后，采用MTS法检测咖啡因和5-FU联合使用及单独使用对肝癌细胞活性的影响。根据OD值绘制柱状图和计算联合指数CI值。MTS结果显示，与单独使用咖啡因或5-FU相比，咖啡因（0.5mM，1mM）和5-FU（25，50μM）联合治疗抑制肝癌的增殖作用更强（图2-A,C）。咖啡因和5-FU联合组的联合指数（CI）值小于1（图2B，D）。这些结果表明，在SMMC-7721和Hep3B细胞中，咖啡因（0，0.5，1mM）和5-FU（0，25，50μM）之间存在协同作用。图2咖啡因联合5-FU对SMMC-7721、Hep3B增殖的影响（A）咖啡因（0.5，1mM）剂量依赖地增强5-FU（0，25，50μM）对肝癌细胞SMMC-7721的抑增殖作用。（B）根据不同浓度咖啡因联合5-FU用药后对肝癌细胞SMMC-7721增殖的抑制情况，计算CI值并绘制点状图。（C）咖啡因（0.5，1mM）剂量依赖地增强5-FU（0，25，
广州医科大学硕士学位论文26图3咖啡因联合5-FU对肝癌细胞凋亡蛋白的影响（A）咖啡因（0，0.5，1mM）和5-FU（0，25，50μM）处理SMMC-7721后，通过WesternBlot检测PARP，Bcl-2和Bcl-xL的表达。（B）咖啡因（0，0.5，1mM）和5-FU（0，25，50μM）处理Hep3B后，通过WesternBlot检测PARP，Bcl-2和Bcl-xL的表达。Figure3Effectofcaffeinecombinedwith5-FUonapoptoticproteinsoflivercancercells（A）AftertreatmentwithCaffeine(0,0.5,1mM)and5-FU(0,25,50μM)inSMMC-7721,theexpressionofPARP,Bcl-2andBcl-xLweredetectedbywesternBlot.（B）AftertreatmentwithCaffeine(0,0.5,1mM)and5-FU(0,25,50μM)inHep3B,theexpressionofPARP,Bcl-2andBcl-xLweredetectedbywesternBlot.4.5-FU联合咖啡因明显抑制肝癌细胞的增殖为了进一步验证咖啡因联合5-FU共同作用后对肝癌细胞增殖作用的影响，我们选取25μM5-FU与1mM咖啡因检测肝癌细胞活性。25μM5-FU和1mM咖啡因联合处理两种肝癌细胞株24h、48h、72h，采用MTS实验方法检测肝癌细胞活性，根据OD值绘制柱状图，结果显示，随着药物处理时间的延长，咖啡因与5-FU联合作用对肝癌细胞抑增殖作用更加明显（图4A，B）。接着，我们采用结晶紫染色法观察药物联合作用后细胞的增殖情况，结果发现，与单药组相比，联合组细胞数量明显减少，均有统计学差异。Hep3B有相似的现象（图4C，D）。另外，
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