报告基因法用于治疗性抗RANKL及抗BLyS单抗生物学活性测定的研究

发布时间：2021-01-24 20:51

　　随着基因重组技术和生物医学工程的快速发展,抗体类药物已成为生物治疗的重要方案。因此,必须建立相关的质量评价技术体系来保证终产品的稳定性、安全性及有效性等,其中生物学活性测定是确保抗体类药物质量的重要指标之一。常见的针对抗体类药物生物学活性测定分析的方法大多是基于体外的细胞检测,如细胞增殖抑制法、细胞毒性法、抗体依赖的细胞介导的细胞毒性法（ADCC）等。如今新兴的报告基因法不同于以上方法,其原理是基于转基因技术将报告基因导入细胞,利用胞内表达的特定产物来实现抗体类药物生物学活性的检测。第一个全人源化抗RANKL单抗药Denosumab（商品名:Xgeva）已于2010年被FDA批准上市,用于治疗绝经后骨质疏松。但其生物学活性测定采用的是均相时间分辨荧光（HTRF）法,此方法只能反映Denosumab的结合活性,不能反映出其真实的作用机制。近年来随着国内生物医药产业的快速发展,抗RANKL单抗药也不断涌现,相应的生物学测定方法（RAW264.7酶活性测定法）也被开发出来,然而该方法存在着操作过程复杂、周期较长（4-5天）、结果变异度高及细胞敏感性低等缺点。本研究旨在建立一种更为简捷稳定的报... 

【文章来源】：中国食品药品检定研究院北京市

【文章页数】：84 页

【学位级别】：硕士

【图文】：

RANKL-RANK-NF-κB信号通路本次研究的实验方案设计主要是构建可以稳定表达萤光素酶报告基因的细胞株，如图2.1所示，通过此萤光素酶表达量的变化来间接反映抗体的效价

2.1 基于 RAW264.7 细胞的报告基因法检测抗 RANKL 单抗生物学活性原理B 淋巴细胞刺激因子（B lymphocyte stimulator，BLyS）是近年来发现的坏死因子家族成员，主要由巨噬细胞和树突状细胞表达，并受多种因子的调 IFN-γ、IL-6 等[42]。BLyS 在体内主要以两种形式存在：一种膜结合型，另是可溶型。膜结合型由 285 个氨基酸组成，分子量为 52kDa，其与相应受体后可诱导 B 淋巴细胞成熟分化并分泌 IgA、IgG 和 IgM 等免疫球蛋白；可溶

图 3. 瞬转 pCA1.1-luc- NF-κB -Hygro 载体质粒的 RAW264.7 细胞对 sRANKL的反应性sRANKL concentration (lg[ng/ml])

【参考文献】：
期刊论文
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本文编号：2997911