酸响应型吲哚菁绿/miRNA-21抑制剂共转运纳米复合物的构建及其抗癌活性研究

发布时间：2021-01-28 08:33

　　癌症是严重危害人类健康的重大疾病之一。和手术、化疗、放疗等传统治疗方法相比,新型治疗手段发挥越来越重要的作用。其中,基因治疗和光疗以其安全低毒、高效可控的特点,具有广阔的应用前景。研究表明,多种癌细胞内均有高表达的miRNA-21,可以利用其抑制剂mi RNA-21i下调表达,调节细胞凋亡信号通路,促进凋亡,抑制增殖、侵袭和转移。光动力治疗通过ROS能够诱导凋亡,同时光热治疗提高肿瘤部位局部温度,也会有效消融肿瘤。因此基因-光疗的联合,能够更有效地杀伤肿瘤。为实现基因-光疗的联合,使药物在溶酶体酸性环境下释放并发挥作用,实现时空可控的精准治疗,本课题以纳米氧化石墨烯为骨架,经过逐层修饰,设计酸响应型、具有电荷反转功能化的多功能载体,同时负载ICG、mi RNA-21i,构建共转运复合物,实现药物的同时运输、酸响应性释放、有序作用和时空可控的联合治疗。以纳米氧化石墨烯为基底,将通过化学反应藕联多聚赖氨酸（PLL）,进而与柠康酐（Cit）形成酰胺键,使纳米载体带负电,进一步,通过静电吸附作用树状大分子（PAMAM）,得到复合纳米载体GO-PLL-Cit-PAMAM。利用Zeta电位、动态光... 

【文章来源】：电子科技大学四川省 211工程院校 985工程院校 教育部直属院校

【文章页数】：90 页

【学位级别】：硕士

【文章目录】：
摘要
abstract
第一章 绪论
    1.1 基因治疗
        1.1.1 miRNA
        1.1.2 miRNA-21
        1.1.3 miRNA-21i
    1.2 肿瘤光疗
        1.2.1 光动力治疗
        1.2.2 光热治疗
        1.2.3 光敏剂
        1.2.4 肿瘤联合治疗
    1.3 纳米载体
        1.3.1 氧化石墨烯
        1.3.2 树枝状大分子
    1.4 酸响应型纳米复合物
    1.5 本课题的研究内容和创新点
        1.5.1 研究内容
        1.5.2 本论文的特色和创新点
第二章 GPCP纳米载体的构建与表征
    2.1 前言
    2.2 实验材料
        2.2.1 实验试剂
        2.2.2 溶液配制
        2.2.3 仪器设备
    2.3 实验方法
        2.3.1 氧化石墨烯超声预处理
        2.3.2 傅里叶变换红外光谱表征
        2.3.3 GO-PLL的制备
        2.3.4 GO-PLL-Cit的制备
        2.3.5 GO-PLL-Cit-PAMAM的制备
        2.3.6 各物质Zeta电位表征
        2.3.7 茚三酮法检测GPCP中PAMAM的结合率
        2.3.8 动态光散射分析
        2.3.9 原子力显微镜表征
        2.3.10 透射电镜表征
        2.3.11 热重分析
        2.3.12 酸响应性电荷反转性质研究
    2.4 实验结果与讨论
        2.4.1 GPCP的合成
        2.4.2 GPCP的结构表征
        2.4.3 GPCP载体水力尺寸检测
        2.4.4 GPCP纳米载体的形貌表征
        2.4.5 热重分析GPCP各组分的比例
        2.4.6 酸响应性电荷反转性质研究
    2.5 本章小结
第三章 GPCP/miRNA-21i/ICG纳米复合药物的构建与表征
    3.1 引言
    3.2 实验材料
        3.2.1 实验试剂
        3.2.2 溶液配制
        3.2.3 实验设备
    3.3 实验方法
        3.3.1 GPCP/miRNA-21i的制备
        3.3.2 琼脂糖凝胶电泳检测miRNA-21i的吸附作用
        3.3.3 验证PAMAM对miRNA-21i的吸附作用
        3.3.4 肝素钠释放及DNaseI降解
        3.3.5 血清稳定性检测
        3.3.6 GPCP/ICG的制备
        3.3.7 GPCP/miRNA-21i/ICG的制备
        3.3.8 紫外-可见吸收光谱分析
        3.3.9 荧光光谱分析
        3.3.10 载药率和包封率测定
        3.3.11 Zeta电位表征
        3.3.12 酸响应性释放
        3.3.13 光热转换能力研究
        3.3.14 单线态氧产率测定
        3.3.15 荧光成像
        3.3.16 光热成像
    3.4 实验结果与讨论
        3.4.1 GPCP/21i的合成和表征
        3.4.2 GPCP/ICG的制备及表征
        3.4.3 GPCP/21i/I的制备及表征
        3.4.4 酸响应性释放
        3.4.5 光热转换性能研究
        3.4.6 单线态氧产率测定
        3.4.7 体外成像研究
    3.5 本章小结
第四章 GPCP/21i/ICG体外基因-光疗联合抗肿瘤研究
    4.1 引言
    4.2 实验材料
        4.2.1 实验细胞
        4.2.2 实验试剂
        4.2.3 溶液配制
        4.2.4 实验设备
    4.3 实验方法
        4.3.1 细胞培养
        4.3.2 生物安全性评估
        4.3.3 细胞内吞分析
        4.3.4 亚细胞定位和溶酶体逃逸研究
        4.3.5 定量PCR实验
        4.3.6 免疫印迹试验（WesternBlot）
        4.3.7 细胞内活性氧检测
        4.3.8 光疗效果
        4.3.9 光疗-基因肿瘤联合治疗
    4.4 实验结果与讨论
        4.4.1 纳米载体的细胞毒性研究
        4.4.2 细胞内吞
        4.4.3 亚细胞定位和溶酶体逃逸研究
        4.4.5 体外基因治疗效应研究
        4.4.6 体外光疗抗癌效应研究
        4.4.7 基因/光疗联合治疗
    4.5 本章小结
第五章 GPCP/21i/ICG体内基因-光疗联合抗肿瘤研究
    5.1 引言
    5.2 实验材料
        5.2.1 实验细胞和动物
        5.2.2 实验试剂
        5.2.3 实验设备
    5.3 实验方法
        5.3.1 细胞培养
        5.3.2 构建实体荷瘤裸鼠模型
        5.3.3 荷瘤裸鼠分组及给药治疗方案
        5.3.4 血常规及生化指标检测
        5.3.5 统计分析方法说明
    5.4 实验结果与讨论
        5.4.1 荷瘤裸鼠荧光成像分析
        5.4.2 荷瘤裸鼠光热成像分析
        5.4.3 裸鼠肿瘤及体重变化检测
        5.4.4 血常规及生化指标结果分析
    5.5 本章小结
第六章 全文总结与展望
    6.1 全文总结
    6.2 展望
致谢
参考文献
硕士期间取得的研究成果


【参考文献】：
期刊论文
[1]刺激响应共负载药物/基因微载体的制备[J]. 陈丽娜,王颖,朱莹,孙一新,王幽香.  高等学校化学学报. 2013(03)



本文编号：3004675