LncRNA HOTAIR特异性吸附miR-206/miR-613调控OATP1B1表达的作用及其机制

发布时间：2021-01-31 09:54

　　背景:miR-206/miR-613在转录后水平调控OATP1B1的表达与功能;LncRNA HOTAIR可作用于miR-206/miR-613调节其靶基因表达,引起对应的功能改变;然而LncRNA HOTAIR对miR-206/miR-613调控OATP1B1是否起作用尚属未知。目的:本文章旨在揭示LncRNA HOTAIR通过miR-206/miR-613对OATP1B1表达的调控作用及其分子机制,为阐明OATP1B1调控机制增添新的内容,对临床进一步研究药物反应的个体差异提供理论基础和科学依据。方法:1.在HepG2细胞中,瞬时转染miR-206/miR-613 mimics及inhibitors,构建miR-206/miR-613过表达和抑制表达细胞模型,采用RT-q PCR、WB技术,研究miR-206/miR-613对OATP1B1 m RNA、蛋白表达的影响。2.在HepG2细胞中,瞬时转染pc DNA3.1-HOTAIR、HOTAIR Smart Silencer和pc DNA3.1、HOTAIR Smart Silencer NC,构建LncRNA HOTAIR过表达... 

【文章来源】：南昌大学江西省 211工程院校

【文章页数】：98 页

【学位级别】：硕士

【文章目录】：
摘要
abstract
中英文缩略词表
第1章 引言
第2章 miR-206/miR-613对OATP1B1 表达的影响
    2.1 材料
        2.1.1 细胞株
        2.1.2 主要试剂
        2.1.3 主要仪器设备
    2.2 方法
        2.2.1 主要溶液的配制
        2.2.2 HepG2 细胞培养
        2.2.3 miR-206/miR-613 mimics及 inhibitors转染
        2.2.4 miR-206/miR-613 mimics及 inhibitors转染对HepG2 细胞中miR-206和miR-613 表达的影响
        2.2.5 miR-206/miR-613 mimics及 inhibitors转染对HepG2细胞中OATP1B1 mRNA表达的影响
        2.2.6 miR-206/miR-613 mimics及 inhibitors转染对HepG2细胞中OATP1B1 蛋白表达的影响
        2.2.7 数据处理与统计分析
    2.3 结果
        2.3.1 HepG2 细胞形态学
        2.3.2 RNA完整性鉴定结果
        2.3.3 扩增产物特异性
        2.3.4 HepG2 细胞蛋白浓度标准曲线
        2.3.5 瞬时转染miR-206/miR-613 mimics或 inhibitors对 HepG2 细胞miR-206/miR-613 表达的影响
        2.3.6 瞬时转染miR-206/miR-613 mimics或 inhibitors对 HepG2 细胞OATP1B1 mRNA表达的影响
        2.3.7 瞬时转染miR-206/miR-613 mimics或 inhibitors对 HepG2 细胞OATP1B1 蛋白表达的影响
    2.4 讨论
第3章 LncRNA HOTAIR对 miR-206/miR-613及OATP1B1 表达的影响
    3.1 材料
        3.1.1 细胞株
        3.1.2 主要试剂
        3.1.3 主要仪器设备
    3.2 方法
        3.2.1 主要溶液的配制
        3.2.2 质粒构建、扩增、提取及鉴定
        3.2.3 pcDNA3.1-HOTAIR及 LncRNA HOTAIR Smart Silencer转染
        3.2.4 pcDNA3.1-HOTAIR及 HOTAIR Smart Silencer转染对miR-206/miR-613表达的影响
        3.2.5 pcDNA3.1-HOTAIR及 HOTAIR Smart Silencer转染对OATP1B1 mRNA表达的影响
        3.2.6 pcDNA3.1-HOTAIR及 HOTAIR Smart Silencer转染对OATP1B1 蛋白表达的影响
        3.2.7 数据处理与统计分析
    3.3 结果
        3.3.1 扩增引物特异性
        3.3.2 瞬时转染pcDNA3.1-HOTAIR及 HOTAIR Smart Silencer对 HOTAIR表达的影响
        3.3.3 瞬时转染pcDNA3.1-HOTAIR及 HOTAIR Smart Silencer对 miR-206/miR-613 表达的影响
        3.3.4 瞬时转染pcDNA3.1-HOTAIR及 HOTAIR Smart Silencer对OATP1B1 mRNA表达的影响
        3.3.5 瞬时转染pcDNA3.1-HOTAIR及 HOTAIR Smart Silencer对OATP1B1 蛋白表达的影响
    3.4 讨论
第4章 miR-206/miR-613对LncRNA HOTAIR调控OATP1B1 蛋白表达的影响
    4.1 材料
        4.1.1 细胞株和质粒
        4.1.2 主要试剂
        4.1.3 主要仪器设备
    4.2 方法
        4.2.1 主要工作液的配置
        4.2.2 HepG2 细胞的培养
        4.2.3 LncRNA HOTAIR-miRNAs共转染
        4.2.4 瞬时共转染LncRNA HOTAIR-miRNAs对 LncRNA HOTAIR表达的影响
        4.2.5 瞬时共转染LncRNA HOTAIR-miRNAs对 miR-206/miR-613 表达的影响
        4.2.6 瞬时共转染LncRNA HOTAIR-miRNAs对 OATP1B1 蛋白表达的影响
        4.2.7 数据处理与统计分析
    4.3 结果
        4.3.1 瞬时共转染LncRNA HOTAIR-miRNAs对 LncRNA HOTAIR表达的影响
        4.3.2 瞬时共转染LncRNA HOTAIR-miRNAs对 miR-206/miR-613 表达的影响
        4.3.3 瞬时共转染LncRNA HOTAIR-miRNAs对 OATP1B1 蛋白表达的影响
    4.4 讨论
第5章 LncRNA HOTAIR特异性吸附miR-206/miR-613 调控OATP1B1 表达的机制研究
    5.1 材料
        5.1.1 细胞株及报告质粒
        5.1.2 主要试剂
        5.1.3 主要仪器设备
    5.2 方法
        5.2.1 HEK-293T细胞的培养
        5.2.2 主要溶液的配制
        5.2.3 质粒构建、扩增、提取及鉴定
        5.2.4 miR-206/miR-613 mimics对 LncRNA HOTAIR报告基因荧光素酶活性的影响
        5.2.5 LncRNA HOTAIR对 OATP1B1 报告基因荧光素酶活性的影响
        5.2.6 荧光素酶活性检测
        5.2.7 数据处理与统计分析
    5.3 结果
        5.3.1 miR-206/miR-613 mimics对 LncRNA HOTAIR报告基因荧光素酶活性的影响
        5.3.2 LncRNA HOTAIR对 OATP1B1 报告基因荧光素酶活性的影响
    5.4 讨论
第6章 结论与展望
    6.1 结论
    6.2 展望
致谢
参考文献
附录
综述
    参考文献


【参考文献】：
期刊论文
[1]miR-206/miR-613对OATP1B1基因和蛋白表达的影响及其机制研究[J]. 饶云,靳高凤,刘名义,李新华,张红,夏春华,熊玉卿.  药学学报. 2016(12)
[2]Analysis of long non-coding RNA expression profiles in gastric cancer[J]. Wei-Jun Cao,Hai-Lu Wu,Bang-Shun He,Yu-Shu Zhang,Zhen-Yu Zhang.  World Journal of Gastroenterology. 2013(23)



本文编号：3010640