5-Aza-CdR促进小鼠海马神经细胞HT22自噬增加通过启动TSC1/mTOR通路
发布时间:2021-02-19 17:07
目的研究5-杂氮脱氧胞嘧啶核苷(5-Aza-2′-deoxycytidine,5-Aza-CdR)能否诱导小鼠海马神经细胞HT22产生自噬对以及TSC1/mTOR通路是否参与其中。方法通过体外培养HT22细胞, 5-Aza-CdR孵育24 h后,采用MTS检测对细胞活力的影响。采用RT-PCR和Western blot,检测TSC1、mTOR和LC3的mRNA和蛋白表达水平;采用组织免疫荧光的方法检测TSC1在不同组别HT22细胞中的表达;通过转染TSC1质粒,检测TSC1/mTOR途径在自噬中的作用。结果 10μmol·L-1 5-Aza-CdR可降低HT22细胞的活力,5-Aza-CdR使TSC1 mRNA和蛋白表达水平增加,p-mTOR (Ser2448)蛋白水平降低,LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ比值升高;过表达TSC1后小鼠海马HT22细胞LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ比值升高。结论 5-Aza-CdR可以诱导HT22自噬增加,可能是通过启动TSC1/mTOR通路。
【文章来源】:中国药理学通报. 2020,36(09)北大核心
【文章页数】:5 页
【文章目录】:
1 材料与方法
1.1 细胞株
1.2 试剂
1.3 仪器
1.4 细胞培养和分组
1.5 5-Aza-CdR处理细胞
1.6 MTS检测细胞活力
1.7 Real time RT-PCR
1.8 Western blot
1.9 免疫组织荧光染色
1.10 质粒构建和DNA转染
1.11 统计学分析
2 结果
2.1 5-Aza-CdR降低HT22细胞的活力
2.2 5-Aza-CdR促进TSC1 mRNA的表达
2.3 5-Aza-CdR可增加TSC1蛋白的表达,降低p-mTOR的表达,增加LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ的比例
2.4 5-Aza-CdR增强小鼠海马中TSC1蛋白的荧光强度
2.5 过表达TSC1抑制p-mTOR,促进LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ的比例增加
3 讨论
【参考文献】:
期刊论文
[1]橘红素对人胃癌AGS细胞自噬的作用及其机制研究[J]. 陈圣敏,龚永昌,隋璐,楚敏,董杨. 中国药理学通报. 2019(12)
本文编号:3041424
【文章来源】:中国药理学通报. 2020,36(09)北大核心
【文章页数】:5 页
【文章目录】:
1 材料与方法
1.1 细胞株
1.2 试剂
1.3 仪器
1.4 细胞培养和分组
1.5 5-Aza-CdR处理细胞
1.6 MTS检测细胞活力
1.7 Real time RT-PCR
1.8 Western blot
1.9 免疫组织荧光染色
1.10 质粒构建和DNA转染
1.11 统计学分析
2 结果
2.1 5-Aza-CdR降低HT22细胞的活力
2.2 5-Aza-CdR促进TSC1 mRNA的表达
2.3 5-Aza-CdR可增加TSC1蛋白的表达,降低p-mTOR的表达,增加LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ的比例
2.4 5-Aza-CdR增强小鼠海马中TSC1蛋白的荧光强度
2.5 过表达TSC1抑制p-mTOR,促进LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ的比例增加
3 讨论
【参考文献】:
期刊论文
[1]橘红素对人胃癌AGS细胞自噬的作用及其机制研究[J]. 陈圣敏,龚永昌,隋璐,楚敏,董杨. 中国药理学通报. 2019(12)
本文编号:3041424
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