紫色马勃的发酵工艺、化学成分及药效学研究
发布时间：2021-02-21 12:15
目的:分离和筛选出紫色马勃的优良菌株;对筛选得到的紫色马勃菌株进行生物学特征研究,掌握其菌丝体生长所需的营养和环境条件;测定紫色马勃子实体和发酵产物中主要的化学成分含量,为其质量评价奠定基础;研究紫色马勃发酵产物对胃溃疡以及肝损伤的预防保护作用,探讨其作用机制,为其药用价值的开发和应用奠定基础。方法:分离纯化出紫色马勃优良菌株,对其生物学特性进行考察;通过单因素考察和正交试验优化紫色马勃液体发酵工艺,确定液体培养基的成分组成和培养条件。利用苯酚-浓硫酸法,测定紫色马勃发酵产物中多糖的含量;利用香草醛高氯酸显色反应测定紫色马勃发酵产物中总三萜的含量;通过HPLC法测定紫色马勃子实体和发酵产物中麦角甾酮以及麦角甾醇的含量;通过束缚水浸致小鼠应激性胃溃疡模型以及酒精致小鼠急性肝损伤模型,研究紫色马勃发酵产物对应激性胃溃疡以及急性肝损伤疾病的预防作用及其机制。结果:经过分离、纯化得到紫色马勃的优良菌株,生物学特性研究表明最适合紫色马勃菌丝生长的培养基配方为葡萄糖浓度2%、酵母粉浓度1%、MgSO4浓度0.1%,最适初始pH值6.5,最适培养温度30℃;紫色马勃液体深层发酵...
【文章来源】：长春中医药大学吉林省
【文章页数】：87 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
紫色马勃子实体
长春中医药大学2020届硕士学位论文7对采集的紫色马勃进行拍照和显微鉴别，结果如图1-3。紫色马勃的子实体中型至较大，呈球状或陀螺状，宽度为5~12cm，不孕基部较为发达[46]。紫色马勃的孢子呈紫色，孢子直径为4~5.5μm，表面有小刺；孢丝较长，有横隔，有分枝，相互交织，粗为2~5μm[47]。图1紫色马勃子实体图2紫色马勃菌孢子（×10000）图3紫色马勃菌孢丝（×2000）2.方法与结果2.1紫色马勃菌种的分离纯化取采集的紫色马勃子实体，在无菌条件下，用75%乙醇擦拭表面，然后分离适当大小组织，迅速接入斜面培养基中，在28℃恒温培养箱中培养，记录萌发时间及生长状态。待萌发至一定大小时，选取菌丝粗壮浓密、无污染的菌落，从中切取小部分菌块接种到新的斜面培养基上，于28℃恒温培养箱培养。重复培养5代，选取生长势最佳留存菌种。经二十次以上的传代后，菌种遗传性状稳定，且4℃保存一个月亦无变异。即获得紫色马勃的纯菌株（菌株编号ZSTMB001号，现保存于吉林省菌物药生物技术工程实验室），可用于后续实验。2.2生物学特性考察2.2.1培养方法根据各培养基组成制备溶液，加热搅拌使其充分溶解混匀后，趁热分装于试管中，每支试管装15mL，塞上自制的棉塞，每组试验平行制作3支试管，捆扎好放入高压蒸汽灭菌锅中，121℃灭菌30分钟，灭菌完成后，制成斜面培养基；
长春中医药大学2020届硕士学位论文7对采集的紫色马勃进行拍照和显微鉴别，结果如图1-3。紫色马勃的子实体中型至较大，呈球状或陀螺状，宽度为5~12cm，不孕基部较为发达[46]。紫色马勃的孢子呈紫色，孢子直径为4~5.5μm，表面有小刺；孢丝较长，有横隔，有分枝，相互交织，粗为2~5μm[47]。图1紫色马勃子实体图2紫色马勃菌孢子（×10000）图3紫色马勃菌孢丝（×2000）2.方法与结果2.1紫色马勃菌种的分离纯化取采集的紫色马勃子实体，在无菌条件下，用75%乙醇擦拭表面，然后分离适当大小组织，迅速接入斜面培养基中，在28℃恒温培养箱中培养，记录萌发时间及生长状态。待萌发至一定大小时，选取菌丝粗壮浓密、无污染的菌落，从中切取小部分菌块接种到新的斜面培养基上，于28℃恒温培养箱培养。重复培养5代，选取生长势最佳留存菌种。经二十次以上的传代后，菌种遗传性状稳定，且4℃保存一个月亦无变异。即获得紫色马勃的纯菌株（菌株编号ZSTMB001号，现保存于吉林省菌物药生物技术工程实验室），可用于后续实验。2.2生物学特性考察2.2.1培养方法根据各培养基组成制备溶液，加热搅拌使其充分溶解混匀后，趁热分装于试管中，每支试管装15mL，塞上自制的棉塞，每组试验平行制作3支试管，捆扎好放入高压蒸汽灭菌锅中，121℃灭菌30分钟，灭菌完成后，制成斜面培养基；
【参考文献】：
期刊论文
[1]盐酸度洛西汀对大鼠应激性胃溃疡保护作用机制的初步探究[J]. 朱宏亮,姜剑伟,张建军. 中国新药杂志. 2019(13)
[2]HPLC双波长法测定小柄马勃子实体、液体发酵菌丝中麦角甾醇和麦角甾酮含量[J]. 杨秀璐,孟佳启,李婷,王淑敏. 中国食用菌. 2018(05)
[3]小柄马勃对慢性肺损伤的治疗及机理研究[J]. 宫诗林,徐祉临,张慧洁,单文欣,赵丞,颜天华,王淑敏. 药学研究. 2017(08)
[4]玉米黑粉菌的生物学特性研究[J]. 翟璐,于琦,侯朵朵,刘馨晨,步洪石,孟佳启,王淑敏. 中国食用菌. 2017(04)
[5]大马勃及大口静灰球的抗炎镇痛作用比较研究[J]. 相聪坤,关胜江,马娟娟. 天津中医药. 2016(07)
[6]黄硬皮马勃子实体提取物抑菌活性[J]. 周会明,张焱珍,柴红梅,张小雷,刘璇,孔令舰,和娇娇. 食用菌学报. 2016(02)
[7]马勃多糖对荷瘤模型小鼠抑瘤作用及生命延长率的影响[J]. 姜明华,田易玲,徐凌川. 山东中医药大学学报. 2014(02)
[8]大马勃抗炎镇痛及体外抑菌作用的研究[J]. 张帆,王大可,李爱欣,王淑敏. 中国食用菌. 2014(02)
[9]吉林省食药用真菌马勃的资源及鉴别研究[J]. 宫诗林,曹玉峰,王淑敏. 亚太传统医药. 2013(12)
[10]四氯化碳对HL-7702肝细胞甘油三酯含量影响[J]. 白剑英,雷佩玉,王幼萍,闫丹丹,梁瑞峰,王祝欣. 中国公共卫生. 2014(01)
硕士论文
[1]两种高等真菌及一种内生真菌化学成分[D]. 邓慧颖.河北大学 2011
[2]马勃化学成分的分离、鉴别及对组织蛋白酶L抑制作用研究[D]. 李小丽.湘潭大学 2011
[3]脱皮马勃化学成分及抗肿瘤活性研究[D]. 崔磊.山东大学 2006
本文编号：3044333
【文章来源】：长春中医药大学吉林省
【文章页数】：87 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
紫色马勃子实体
长春中医药大学2020届硕士学位论文7对采集的紫色马勃进行拍照和显微鉴别，结果如图1-3。紫色马勃的子实体中型至较大，呈球状或陀螺状，宽度为5~12cm，不孕基部较为发达[46]。紫色马勃的孢子呈紫色，孢子直径为4~5.5μm，表面有小刺；孢丝较长，有横隔，有分枝，相互交织，粗为2~5μm[47]。图1紫色马勃子实体图2紫色马勃菌孢子（×10000）图3紫色马勃菌孢丝（×2000）2.方法与结果2.1紫色马勃菌种的分离纯化取采集的紫色马勃子实体，在无菌条件下，用75%乙醇擦拭表面，然后分离适当大小组织，迅速接入斜面培养基中，在28℃恒温培养箱中培养，记录萌发时间及生长状态。待萌发至一定大小时，选取菌丝粗壮浓密、无污染的菌落，从中切取小部分菌块接种到新的斜面培养基上，于28℃恒温培养箱培养。重复培养5代，选取生长势最佳留存菌种。经二十次以上的传代后，菌种遗传性状稳定，且4℃保存一个月亦无变异。即获得紫色马勃的纯菌株（菌株编号ZSTMB001号，现保存于吉林省菌物药生物技术工程实验室），可用于后续实验。2.2生物学特性考察2.2.1培养方法根据各培养基组成制备溶液，加热搅拌使其充分溶解混匀后，趁热分装于试管中，每支试管装15mL，塞上自制的棉塞，每组试验平行制作3支试管，捆扎好放入高压蒸汽灭菌锅中，121℃灭菌30分钟，灭菌完成后，制成斜面培养基；
长春中医药大学2020届硕士学位论文7对采集的紫色马勃进行拍照和显微鉴别，结果如图1-3。紫色马勃的子实体中型至较大，呈球状或陀螺状，宽度为5~12cm，不孕基部较为发达[46]。紫色马勃的孢子呈紫色，孢子直径为4~5.5μm，表面有小刺；孢丝较长，有横隔，有分枝，相互交织，粗为2~5μm[47]。图1紫色马勃子实体图2紫色马勃菌孢子（×10000）图3紫色马勃菌孢丝（×2000）2.方法与结果2.1紫色马勃菌种的分离纯化取采集的紫色马勃子实体，在无菌条件下，用75%乙醇擦拭表面，然后分离适当大小组织，迅速接入斜面培养基中，在28℃恒温培养箱中培养，记录萌发时间及生长状态。待萌发至一定大小时，选取菌丝粗壮浓密、无污染的菌落，从中切取小部分菌块接种到新的斜面培养基上，于28℃恒温培养箱培养。重复培养5代，选取生长势最佳留存菌种。经二十次以上的传代后，菌种遗传性状稳定，且4℃保存一个月亦无变异。即获得紫色马勃的纯菌株（菌株编号ZSTMB001号，现保存于吉林省菌物药生物技术工程实验室），可用于后续实验。2.2生物学特性考察2.2.1培养方法根据各培养基组成制备溶液，加热搅拌使其充分溶解混匀后，趁热分装于试管中，每支试管装15mL，塞上自制的棉塞，每组试验平行制作3支试管，捆扎好放入高压蒸汽灭菌锅中，121℃灭菌30分钟，灭菌完成后，制成斜面培养基；
【参考文献】：
期刊论文
[1]盐酸度洛西汀对大鼠应激性胃溃疡保护作用机制的初步探究[J]. 朱宏亮,姜剑伟,张建军. 中国新药杂志. 2019(13)
[2]HPLC双波长法测定小柄马勃子实体、液体发酵菌丝中麦角甾醇和麦角甾酮含量[J]. 杨秀璐,孟佳启,李婷,王淑敏. 中国食用菌. 2018(05)
[3]小柄马勃对慢性肺损伤的治疗及机理研究[J]. 宫诗林,徐祉临,张慧洁,单文欣,赵丞,颜天华,王淑敏. 药学研究. 2017(08)
[4]玉米黑粉菌的生物学特性研究[J]. 翟璐,于琦,侯朵朵,刘馨晨,步洪石,孟佳启,王淑敏. 中国食用菌. 2017(04)
[5]大马勃及大口静灰球的抗炎镇痛作用比较研究[J]. 相聪坤,关胜江,马娟娟. 天津中医药. 2016(07)
[6]黄硬皮马勃子实体提取物抑菌活性[J]. 周会明,张焱珍,柴红梅,张小雷,刘璇,孔令舰,和娇娇. 食用菌学报. 2016(02)
[7]马勃多糖对荷瘤模型小鼠抑瘤作用及生命延长率的影响[J]. 姜明华,田易玲,徐凌川. 山东中医药大学学报. 2014(02)
[8]大马勃抗炎镇痛及体外抑菌作用的研究[J]. 张帆,王大可,李爱欣,王淑敏. 中国食用菌. 2014(02)
[9]吉林省食药用真菌马勃的资源及鉴别研究[J]. 宫诗林,曹玉峰,王淑敏. 亚太传统医药. 2013(12)
[10]四氯化碳对HL-7702肝细胞甘油三酯含量影响[J]. 白剑英,雷佩玉,王幼萍,闫丹丹,梁瑞峰,王祝欣. 中国公共卫生. 2014(01)
硕士论文
[1]两种高等真菌及一种内生真菌化学成分[D]. 邓慧颖.河北大学 2011
[2]马勃化学成分的分离、鉴别及对组织蛋白酶L抑制作用研究[D]. 李小丽.湘潭大学 2011
[3]脱皮马勃化学成分及抗肿瘤活性研究[D]. 崔磊.山东大学 2006
本文编号：3044333
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