三氟甲基苯甲酰胺类化合物XX03529对慢性粒细胞白血病K562细胞株的抗肿瘤活性及其作用机制的研究

发布时间：2021-02-25 04:43

　　目前,治疗慢性粒细胞白血病的一线治疗药物Imatinib出现患者不耐受以及耐药性频繁发生等问题,使得开发新型的该类小分子靶向治疗药物成为研究热点。同时,在我国国内还没有自主研发上市的药物。因此,本项研究目的是为了开发出更加安全有效且具有较Imatinib更加优越的抗CML活性的新型酪氨酸激酶抑制剂。三氟甲基苯甲酰胺类化合物XX03529是通过合理药物设计的理论思想,运用骨架跃迁的药物设计方法对已上市药物Imatinib的结构进行优化改造,合成得到的一个母核结构全新的化合物实体。本文旨在研究XX03529的抗肿瘤活性及其作用机制。通过MTT比色方法分别检测了XX03529对慢性粒细胞白血病K562细胞株、人肺癌A549细胞株、人胃癌MKN45细胞株及人胃肠道间质瘤GIST882细胞株的增殖抑制作用,试验得到了该化合物对4种肿瘤细胞的半数抑制浓度IC₅₀值依次为0.019±0.011μmol/L,8.319±5.361μmol/L,7.577±2.943μmol/L,5.353±1.742μmol/L。该结果证明了XX03529对慢性粒细胞白血病K562细胞的选择性较... 

【文章来源】：辽宁大学辽宁省 211工程院校

【文章页数】：83 页

【学位级别】：硕士

【文章目录】：
摘要
abstract
第1章 论文选题依据及研究内容
    1.1 研究现状及研究意义
    1.2 研究目的及研究内容
        1.2.1 研究目的
        1.2.2 研究内容及技术路线
第2章 XX03529对慢性粒细胞白血病K562细胞株的抗肿瘤活性研究
    2.1 前言
    2.2 XX03529的纯度分析研究
        2.2.1 材料及试剂
        2.2.2 实验仪器
        2.2.3 XX03529紫外最大吸收波长的确定
        2.2.4 HPLC色谱流动相条件
        2.2.5 试验样品XX03529的纯度测定
    2.3 XX03529对肿瘤细胞抑制作用的选择性研究
        2.3.1 材料及试剂
        2.3.2 实验仪器
        2.3.3 试验试剂的配制及试验用品准备
        2.3.4 细胞培养方法
        2.3.5 肿瘤细胞生长曲线的测定
        2.3.6 MTT比色试验检测药物对肿瘤细胞的选择性
    2.4 四甲基偶氮唑蓝（MTT）比色法检测XX05329对K562细胞的增殖抑制率并绘制时效曲线及量效曲线
        2.4.1 材料及试剂
        2.4.2 实验仪器
        2.4.3 试验方法
    2.5 软琼脂克隆形成试验检测K562细胞对XX03529的敏感性
        2.5.1 材料及试剂
        2.5.2 实验仪器
        2.5.3 试验试剂的配制及试验用品准备
        2.5.4 软琼脂克隆形成试验方法
    2.6 试验结果
        2.6.1 XX03529的纯度分析研究结果
        2.6.2 四种肿瘤细胞生长曲线的测定结果
        2.6.3 药物对四种肿瘤细胞的增殖抑制率及其IC50值
        2.6.4 XX03529对K562细胞的时效曲线及量效曲线
        2.6.5 K562细胞对XX03529的敏感性试验结果
    2.7 讨论
    2.8 小结
第3章 XX03529对慢性粒细胞白血病K562细胞株的作用机制研究
    3.1 前言
    3.2 XX03529对K562细胞分化及细胞周期动力学的影响
        3.2.1 材料及试剂
        3.2.2 实验仪器
        3.2.3 Wright-Giemsa复合染色检测药物诱导细胞分化研究
        3.2.4 流式细胞术检测药物对细胞周期动力学研究
    3.3 XX03529对K562细胞凋亡的诱导效应研究
        3.3.1 材料及试剂
        3.3.2 实验仪器
        3.3.3 AO-EB双染色检测细胞凋亡形态变化
        3.3.4 DNAladder试验
        3.3.5 流式细胞术检测药物诱导细胞凋亡作用
    3.4 XX03529对K562细胞的基因表达影响
        3.4.1 材料及试剂
        3.4.2 实验仪器
        3.4.3 提取细胞总RNA
        3.4.4 RNA逆转录
        3.4.5 RT-PCR技术扩增目的基因检测药物对细胞基因的表达量影响
    3.5 XX03529对K562细胞中蛋白表达的影响
        3.5.1 材料及试剂
        3.5.2 实验仪器
        3.5.3 试剂配制
        3.5.4 蛋白样品的制备
        3.5.5 BCA法检测蛋白浓度
        3.5.6 Western-blot试验方法
    3.6 试验结果
        3.6.1 Wright-Giemsa复合染色检测药物诱导细胞分化研究
        3.6.2 流式细胞术检测药物对细胞周期动力学研究
        3.6.3 AO-EB双染色检测细胞凋亡形态变化
        3.6.4 DNAladder试验
        3.6.5 流式细胞术检测药物诱导细胞凋亡作用
        3.6.6 RT-PCR技术扩增目的基因检测药物对细胞基因的表达量影响
        3.6.7 XX03529对K562细胞中蛋白表达的影响
    3.7 讨论
    3.8 小结
第4章 基于计算机辅助药物设计软件的XX03529三维小分子模型的作用机制研究
    4.1 前言
    4.2 研究方法
        4.2.1 构建小分子配体数据库
        4.2.2 分子对接
    4.3 研究结果与讨论
    4.4 小结
第5章 全文总结
    5.1 全文总结
        5.1.1 主要结论
        5.1.2 主要创新点
致谢
参考文献
攻读学位期间发表的学术论文及参加科研情况



本文编号：3050461