基于巨噬细胞极化表型筛选吡唑联苯基酰胺治疗脑脊髓炎的分子机制研究

发布时间：2021-02-25 03:12

　　研究目的:多发性硬化症（Multiple Sclerosis,MS）是临床常见的中枢神经系统脱髓鞘疾病,其病理进程可引起脑和脊髓的损伤进而严重影响患者的生存质量。目前临床上采取的治疗手段如免疫调节剂芬戈莫德只能在一定程度上延缓疾病进展,无法从根本上修复受损髓鞘和预防炎症。M1型极化的巨噬细胞分泌炎性因子导致炎症的发生,而M2型极化的巨噬细胞则有利于髓鞘和轴突的修复,并有抑制炎症的作用,从而兼具髓鞘修复和免疫调控的作用。本课题通过实验室内部的化合物库筛选得到促进巨噬细胞M2型极化的新型化合物骨架结构,并对这种化合物骨架进行结构优化,研究其对多发性硬化症的治疗作用和分子机制。研究方法:1.调控巨噬细胞极化的化合物筛选:1)RAW264.7小鼠巨噬细胞株给予具有不同骨架的化合物,单独作用24h采用qRT-PCR检测巨噬细胞M2型基因Arg1和M1型基因Mcp1的mRNA变化水平;2)RAW264.7小鼠巨噬细胞株预先用LPS刺激24h后给予具有不同骨架的化合物作用24h,采用qRT-PCR检测巨噬细胞M1型基因Mcp1的mRNA变化水平;3)原代巨噬细胞（Bone Marrow Derive... 

【文章来源】：浙江大学浙江省 211工程院校 985工程院校 教育部直属院校

【文章页数】：99 页

【学位级别】：硕士

【文章目录】：
致谢
中文摘要
Abstract
缩略词表
1. 前言
2. 实验仪器和材料
    2.1 实验仪器
    2.2 药物与试剂
    2.3 实验细胞及动物来源
3. 实验方法
    3.1 细胞培养
    3.2 Real-time PCR
    3.3 Western blot检测相关蛋白
    3.4 EAE小鼠模型构建
    3.5 H&E染色
    3.6 LFB染色
    3.7 小鼠体内单核细胞的分离
+T细胞增殖试验">    3.8 巨噬细胞抑制CD4⁺T细胞增殖试验
    3.9 流式细胞术
    3.10 基因芯片（microarray）分析
    3.11 D11大鼠生物利用度研究
    3.12 数据分析
4. 实验结果
    4.1 基于表型筛选促进巨噬细胞M2型极化化合物及其验证
        4.1.1 基于表型促进巨噬细胞M2型极化化合物筛选
        4.1.2 D11促进BMDMs M2型极化并抑制LPS诱导的M1型极化
        4.1.3 D11未对BMDC的成熟产生明显影响
+T细胞的分化产生明显影响">        4.1.4 D11未对CD4⁺T细胞的分化产生明显影响
+T细胞的增殖">        4.1.5 D11通过作用巨噬细胞抑制CD4⁺T细胞的增殖
    4.2 D11对MS小鼠模型EAE的治疗作用研究
        4.2.1 D11药代动力学研究
        4.2.2 D11缓解MS疾病模型EAE小鼠的疾病进展
        4.2.3 D11减轻EAE小鼠脊髓中的炎性反应和髓鞘损伤
    4.3 D11对EAE小鼠体内各类免疫细胞的作用
        4.3.1 D11可以促进EAE小鼠体内巨噬细胞M2型极化并抑制M1型极化
        4.3.2 D11对EAE小鼠体内树突细胞和Treg细胞未产生明显影响
    4.4 D11促进巨噬细胞M2型极化机制研究
        4.4.1 D11促进巨噬细胞M2型基因表达及激活信号转导通路
        4.4.2 D11激活巨噬细胞中的AKT/STAT3信号通路
        4.4.3 敲除STAT3对BMDC的成熟未产生明显影响
        4.4.4 敲除STAT3对BMDM的极化未产生明显影响
fl/fl小鼠造EAE模型症状减轻">        4.4.5 Lysm cre STAT3^fl/fl小鼠造EAE模型症状减轻
fl/fl小鼠外周巨噬细胞的极化未发生明显变化">        4.4.6 Lysm cre STAT3^fl/fl小鼠外周巨噬细胞的极化未发生明显变化
fl/fl小鼠树突细胞的成熟未发生明显变化">        4.4.7 Lysm cre STAT3^fl/fl小鼠树突细胞的成熟未发生明显变化
fl/fl小鼠中枢浸润M2型巨噬细胞增加">        4.4.8 Lysm cre STAT3^fl/fl小鼠中枢浸润M2型巨噬细胞增加
5. 讨论
参考文献
综述 AKT/mTOR/STAT信号通路调控介导MS的各类免疫细胞
    参考文献
作者简历及硕士期间科研成果



本文编号：3050353