筛选增强视网膜血管屏障的药物及其结构活性相关性研究

发布时间：2021-03-22 16:30

　　在眼科疾病中,视网膜血管渗漏、出血是人类致盲的主要原因之一。视网膜血管屏障（Blood-Retinal Barrier,BRB）的改变在视网膜疾病的发展中起着至关重要的作用。糖尿病视网膜病变和年龄相关性黄斑变性是两种最常见的视网膜疾病,BRB的病变与它们直接相关。因此,我们旨在建立筛选增强视网膜血管内皮细胞稳定性的药物筛选平台,期望通过该平台筛选出能够有效抑制血管内皮细胞稳定性降低的小分子化合物,增强BRB的屏障作用。然后对活性化合物进行结构活性相关性分析,寻找其结构活性中心。本实验选用了艾森生物有限公司xCELLigene RTCA检测系统,实时检测细胞基质电阻值的改变--电极细胞基质阻抗传感（Electric Cell-substrate Impedance Sensing,ECIS）,建立增强血管内皮细胞单层稳定性的高通量药物筛选平台,并筛选了2100个由已知活性化合物组成的小分子化合物库。两种不同的检测血管内皮细胞单层渗漏的实验方法——XPerT实验和Transwell渗漏实验作为二级筛选,随后探究了Apigenin增强血管内皮稳定性的分子信号机制和结构活性相关性分析。此外,我... 

【文章来源】：电子科技大学四川省 211工程院校 985工程院校 教育部直属院校

【文章页数】：53 页

【学位级别】：硕士

【部分图文】：

ECIS检测IL-1β诱导HRMEC细胞单层通透性增高

筛选中得到11个阳性化合物。对这11个化合物进行多浓度梯度的二次复筛，每个小分子化合物我们选用了3种浓度(50μΜ、 16.7μΜ、5.6μΜ)进行实验。在这11个小分子化合物中只有4个小分子化合物筛选结果呈阳性，如图3-2所示，另外7个小分子化合物为假阳性。结果表明，三种浓度的Ethaverine hydrochloride对IL-1β诱导的HRMEC细胞单层通透性增高具有一定的抑制作用如图3-2(a)所示。当Apigenin浓度较低时，如16.7μΜ、5.6μΜ，抑制IL-1β诱导的HRMEC细胞单层通透性增高。当Apigenin浓度为50μΜ时，无增强血管内皮细胞稳定性的作用如图3-2(b)所示。其主要原因是当Apigenin浓度过高时，Apigenin对HRMEC细胞具有一定毒性，导致HRMEC细胞死亡。Deguelin具有增强血管内皮细胞稳定性的作用，当Deguelin浓度为16.7μΜ时抑制效果最佳如图3-2(c)所示。Dihydrocelastrol具有很好的抑制IL-1β诱导的HRMEC细胞单层通透性增高的作用如图3-2(d)所示。Dihydrocelastrol浓度越低抑制IL-1β诱导的HRMEC细胞单层通透性增高的作用越明显；当Dihydrocelastrol浓度为50μΜ时，对HRMEC细胞有毒性。

电子科技大学硕士学位论文胞单层的稳定性作用，实验证明了apigenin能够抑制单层通透性增高。然后，我们利用CCK-8试剂盒测定增殖作用的影响。我们通过一系列的实验探究apigenin胞单层通透性增高的分子作用机制。在WB检测蛋白磷in抑制IL-1β诱导的血管内皮细胞单层通透性增高与。我们的实验表明，apigenin并不影响IL-1β诱导P65蛋程。apigenin不通过IL-1β介导的NF-κB核转录途径来高。


本文编号：3094116