重组人促卵泡激素N端不均一性研究
发布时间：2021-03-26 02:45
重组人促卵泡激素（Recombinant human follicle stimulating hormone,rh FSH）由α,β两条肽链通过非共价键组成,通过基因重组技术,将编码人FSH的目的基因导入到中国仓鼠卵巢细胞（CHO）,经过细胞培养,分离和纯化后而得rh FSH,可用于不孕不育的诊断和治疗,可促使卵泡正常生长和雌性激素的产生,在治疗不孕不育症方面具有重要的药用价值。国外原研药重组促卵泡激素（rh FSH）产品主要由默克雪兰诺公司生产的Gonal-F（果纳芬）,以及默沙东公司生产的Puregon（普丽康）,国内产品只有长春金赛药业生产的金赛恒获批上市,目前,国内已有近10家企业正在处于临床或申报阶段。据文献报道,原研药rh FSH的α和β亚基存在N端氨基酸缺失的现象,α亚基N端缺失13个氨基酸,N端缺失α亚基比例约为2%,而β亚基N端缺失2个氨基酸,N端缺失β亚基比例约为50%,目前N端缺失这种现象广泛存在,这种现象可能是蛋白质翻译后修饰所引起。根据生物类似药研发与技术评价指导原则,我国企业获批上市的生物类似药质量标准应不低于国外原研药产品,其分子结...
【文章来源】：吉林大学吉林省 211工程院校 985工程院校 教育部直属院校
【文章页数】：66 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
目的肚段pL1的鉴别肤图
图 3.22 缺失βL1-2 质谱图谱图 3.23 完整βL1-2 质谱图谱表 3.3 相对分子质量检测结果020406080100%Int.500 1000 1500 2000 2500 3000 3500 4000 4500 5000Mass/Charge108 mV[sum= 10813 mV] Profiles 1-100 Smooth Gauss 5 -Baseline 15Data: BETA-T1-2-10001.B3 12 Dec 2017 10:38 Cal: 20180111_ref 11 Jan 2018 15:43Kratos PCAxima CFRplus V2.4.0: Mode reflectron_2GHz, Power: 109, Blanked, P.Ext. @ 2464 (bin 141)2182.70 {r5889}2139.66 {r6085}567.21 {r2285}2125.66 {r5818}623.13 {r2614}
Waters 2695 的最大受压（4000 psi），虽然提高柱箱温度会降低系统压力，但是温度太高（超过 60℃）时，色谱柱填料会溶解于流动相中，导致色谱柱分离效果下降，使用寿命缩短；UPLC（超高效液相色谱）可以承受更高的压力，粒径小于 2 μm 的色谱柱可以在 UPLC 上使用，实验证明，在 UPLC 上可以使缺失和完整 βL1 有效分离，分离度达到更大，但是，由于目前 UPLC 还没有普及，其价格昂贵，仪器操作要求更高，大多数企业的研究方法还是以 HPLC 为主，因此，关于 UPLC 的实验方法，本文不再详细研究，只对较广泛的 HPLC 方法进行详细研究。因此，本文最终选用了 2.7 μm 的色谱柱，不仅可以有效分离缺失和完整 βL1，而且在柱温 55℃时，压力只有 1600 psi，可以使色谱柱达到最佳使用寿命。3.3 胰蛋白酶酶切条件优化3.3.1 增加胰蛋白酶酶量
【参考文献】：
期刊论文
[1]重组人促卵泡激素N末端不均一性分析方法研究[J]. 杨少慧,李晶,梁成罡. 药物分析杂志. 2017(05)
[2]长效重组人促卵泡激素主要功效的对比研究[J]. 李湛军,王俊玲,李心欣,吴彦卓,梁成罡. 药物分析杂志. 2016(03)
[3]重组人促卵泡激素质量控制中理化测定代替生物测定简介[J]. 李湛军,梁成罡,杨化新. 药物分析杂志. 2014(09)
[4]低剂量重组人促卵泡刺激素（rFSH）递增方案诱导排卵的多中心前瞻性研究[J]. 刘金勇,王媁,张松英,郑洁,刘嘉茵. 生殖与避孕. 2014(01)
[5]重组人促卵泡激素研究进展[J]. 刘金钏,彭贵子,卢智俊,左联. 中国药科大学学报. 2013(03)
[6]重组人促卵泡激素在CHO细胞中的表达[J]. 何太平,唐菁燕,徐珑,宋春雷,谭晓晶,聂艳桃,杨波,雷韬. 中国生物制品学杂志. 2011(12)
[7]重组人促卵泡激素（rhFSH）肽图分析方法研究[J]. 梁成罡,沈舒,杨化新. 中国生化药物杂志. 2010(05)
[8]柱前衍生化反相高效液相色谱法定量测定重组人促卵泡激素中的单糖[J]. 程宾,梁成罡,杨化新. 药物分析杂志. 2008(09)
[9]RP-HPLC测定重组人促卵泡激素中唾液酸含量[J]. 程宾,杨化新,梁成罡,冯芳. 药物分析杂志. 2007(09)
硕士论文
[1]重组人促卵泡激素的质量研究[D]. 陈宁.吉林大学 2007
[2]重组人促卵泡激素的纯化及鉴定[D]. 刘慧娟.吉林大学 2007
本文编号：3100794
【文章来源】：吉林大学吉林省 211工程院校 985工程院校 教育部直属院校
【文章页数】：66 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
目的肚段pL1的鉴别肤图
图 3.22 缺失βL1-2 质谱图谱图 3.23 完整βL1-2 质谱图谱表 3.3 相对分子质量检测结果020406080100%Int.500 1000 1500 2000 2500 3000 3500 4000 4500 5000Mass/Charge108 mV[sum= 10813 mV] Profiles 1-100 Smooth Gauss 5 -Baseline 15Data: BETA-T1-2-10001.B3 12 Dec 2017 10:38 Cal: 20180111_ref 11 Jan 2018 15:43Kratos PCAxima CFRplus V2.4.0: Mode reflectron_2GHz, Power: 109, Blanked, P.Ext. @ 2464 (bin 141)2182.70 {r5889}2139.66 {r6085}567.21 {r2285}2125.66 {r5818}623.13 {r2614}
Waters 2695 的最大受压（4000 psi），虽然提高柱箱温度会降低系统压力，但是温度太高（超过 60℃）时，色谱柱填料会溶解于流动相中，导致色谱柱分离效果下降，使用寿命缩短；UPLC（超高效液相色谱）可以承受更高的压力，粒径小于 2 μm 的色谱柱可以在 UPLC 上使用，实验证明，在 UPLC 上可以使缺失和完整 βL1 有效分离，分离度达到更大，但是，由于目前 UPLC 还没有普及，其价格昂贵，仪器操作要求更高，大多数企业的研究方法还是以 HPLC 为主，因此，关于 UPLC 的实验方法，本文不再详细研究，只对较广泛的 HPLC 方法进行详细研究。因此，本文最终选用了 2.7 μm 的色谱柱，不仅可以有效分离缺失和完整 βL1，而且在柱温 55℃时，压力只有 1600 psi，可以使色谱柱达到最佳使用寿命。3.3 胰蛋白酶酶切条件优化3.3.1 增加胰蛋白酶酶量
【参考文献】：
期刊论文
[1]重组人促卵泡激素N末端不均一性分析方法研究[J]. 杨少慧,李晶,梁成罡. 药物分析杂志. 2017(05)
[2]长效重组人促卵泡激素主要功效的对比研究[J]. 李湛军,王俊玲,李心欣,吴彦卓,梁成罡. 药物分析杂志. 2016(03)
[3]重组人促卵泡激素质量控制中理化测定代替生物测定简介[J]. 李湛军,梁成罡,杨化新. 药物分析杂志. 2014(09)
[4]低剂量重组人促卵泡刺激素（rFSH）递增方案诱导排卵的多中心前瞻性研究[J]. 刘金勇,王媁,张松英,郑洁,刘嘉茵. 生殖与避孕. 2014(01)
[5]重组人促卵泡激素研究进展[J]. 刘金钏,彭贵子,卢智俊,左联. 中国药科大学学报. 2013(03)
[6]重组人促卵泡激素在CHO细胞中的表达[J]. 何太平,唐菁燕,徐珑,宋春雷,谭晓晶,聂艳桃,杨波,雷韬. 中国生物制品学杂志. 2011(12)
[7]重组人促卵泡激素（rhFSH）肽图分析方法研究[J]. 梁成罡,沈舒,杨化新. 中国生化药物杂志. 2010(05)
[8]柱前衍生化反相高效液相色谱法定量测定重组人促卵泡激素中的单糖[J]. 程宾,梁成罡,杨化新. 药物分析杂志. 2008(09)
[9]RP-HPLC测定重组人促卵泡激素中唾液酸含量[J]. 程宾,杨化新,梁成罡,冯芳. 药物分析杂志. 2007(09)
硕士论文
[1]重组人促卵泡激素的质量研究[D]. 陈宁.吉林大学 2007
[2]重组人促卵泡激素的纯化及鉴定[D]. 刘慧娟.吉林大学 2007
本文编号：3100794
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