炭样小单孢菌JXNU-1中抗生素生物合成相关基因簇P450的功能分析

发布时间：2021-04-01 07:48

　　炭样小单孢菌JXNU-1（M.carbonacea JXNU-1）是实验室前期由瑶湖农田土壤样品中分离出的一株稀有放线菌,它可以产生一种核苷类的广谱抗生素JX,其基因簇P450为抗生素JX合成相关基因簇,但它的具体功能仍不清楚基因敲除是常用的基因功能研究手段,它通过移除目的基因构建基因缺失菌株,通过比较基因缺失菌株与野生型菌株的表现型差异研究目的基因的功能。本文通过构建基因簇P450缺失突变株炭样小单孢菌JXNU-ΔP450以及回复突变株炭样小单孢菌JXNU-re,研究基因簇P450在炭样小单孢菌JXNU-1产抗生素JX的生物合成中的作用,具体过程和结果如下:1.以温敏型质粒pKC1139作为模板,导入炭样小单孢菌JXNU-1目的基因上下游片段作为同源交换臂以及质粒pIJ790上氯霉素抗性标记基因cat,成功构建炭样小单孢菌JXNU-1基因敲除载体pFD306,经测序验证后,通过电转化导入野生型炭样小单孢菌JXNU-1受体菌,再通过抗性筛选、目的基因PCR扩增及扩增产物测序验证,成功构建基因缺失株炭样小单孢菌JXNU-ΔP450,并通过PCR产物验证以及测序验证确定了目的基因簇的缺失。... 

【文章来源】：江西师范大学江西省

【文章页数】：70 页

【学位级别】：硕士

【部分图文】：

同源重组技术替换目的基因Fig.1-1Replacedesirablegenebyhomologousrecombination

图 1-2 锌指蛋白结构Fig.1-2 Structure of the zinc finger proteinNA、RNA 这类核酸结合，还能结合 DNA白或自身，在转录和翻译水平上调控基因

图 1-4TALE蛋白结构Fig.1-4 Structure of the TALE proteinTALE 识别 DNA 的机制在于不同的 RVD 能够相对特异地分别识别 A、TC、G 4 种碱基中的一种。通过对天然 TALE 的研究发现，有 20 多种不同的 RVD

【参考文献】：
期刊论文
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硕士论文
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本文编号：3112958