适配子和类脂多胺修饰的阳离子脂质体负载let-7a靶向治疗肺癌

发布时间：2021-04-07 13:36

　　目的:构建适配子（AS1411）修饰的负载let-7a的类脂多胺修饰的阳离子脂质体（Apt-NLs-let-7a）,评价其制剂学性质、体外细胞学特征以及与化疗药物顺铂联合用药的抗肿瘤效果。方法:通过置换和酰胺化反应合成类脂质阳离子载体材料N,N’-二油酰三羟甲基氨基甲烷（2-氨基乙基）胺（N,N’-dioleoyl tris（2-aminoethyl）amine,NDOA）,并利用开环反应合成羧基甜菜碱（CB）。通过硅胶薄层色谱法（TLC）、傅里叶变换红外光谱法（FT-IR）、核磁共振法（1H-NMR）和液质联用法（LC-MS）等对上述合成产物进行结构验证。采用乙醇注入法制备阳离子脂质体（NLs）,并利用静电吸附制备适配子修饰的负载miRNA的阳离子脂质体（Apt-NLs-miRNA）,并测定其粒径、Zeta电位、稳定性和miRNA的包封率。以人源非小细胞肺腺癌A549细胞和人源肾上皮293T细胞为模型,MTT法考察空白NLs对A549与293T细胞的安全性。采用流式细胞仪（Flow Cytometry,FCM）和激光共聚焦显微镜（Confocal laser scanning mic... 

【文章来源】：苏州大学江苏省

【文章页数】：82 页

【学位级别】：硕士

【部分图文】：

图１－３．非病毒的载体??Ｆｉ．?１－３．?Ｎｏｎ－ｖｉｒａｌ?ｄｅｌｉｖｅｒｓｓｔｅｍｓ?ｆｏｒ?ｍｉＲＮＡｓ??

ｍｉＲＮＡ负载和细胞摄取率，羧基甜菜碱发挥溶酶体快速逃逸等。当ｌｅｔ－７ａ负载上述??制剂进入小鼠体内后，通过有效抑制ｋ－Ｒａｓ蛋白的表达，抑制癌细胞增殖、侵袭，促??进癌细胞凋亡，从而达到治疗肺癌的效果（图１－４）。??８??

至分液漏斗中，加入乙酸乙酯和水萃取三次。萃取完成后，将有机相旋转蒸发，以除去??过量的乙酸乙酯和三氟乙醇。旋转蒸发得到的粗产物进行ＴＬＣ分析，展开剂：石油醚：??乙酸乙酯＝２０：１。??分离纯化：称取硅胶约８０?ｇ，石油醚浸泡，沿一定的方向快速搅拌均匀后湿法装??柱，用石油醚以一定的流速和压力压实硅胶柱，使其达到平衡状态。取样品溶液缓慢??滴加到柱上方，以梯度洗脱的方法进行湿法硅胶柱层析，分瓶收集洗脱液。ＴＬＣ检??测以确定含有纯净油酸三氟乙酯的收集瓶，合并收集瓶后旋转蒸发除去洗脱液，得到??较为纯净的产物即为油酸三氟乙酯。??化学结构表征：ＴＬＣ分析；ｂ－ＮＭＲ分析；ＦＴ－ＩＲ分析。??２．１．２．?ＮＤＯＡ?的合成??将１．０７?ｇ三－（２－氨乙基）胺和２０?ｍＬ乙醇混合均匀后加至１００?ｍＬ的圆底烧瓶中，??再加入２．１．１制得的油酸三氟乙酯４．０?ｇ，在氮气保护的情况下８５°Ｃ搅拌２４?ｈ。反应结??束后，将所得的粗产物进行硅胶薄层色谱（ＴＬＣ）分析。展开剂：ＣＨＣ１３：?ＣＨ３ＯＨ＝１０：１。??

【参考文献】：
期刊论文
[1]Let-7a表达质粒的构建及其对肺癌A549细胞k-Ras蛋白表达的抑制作用[J]. 何晓燕,陈俊霞,欧阳溪,张政,彭惠民.  南方医科大学学报. 2010(11)
[2]非小细胞肺癌的治疗进展[J]. 朱立桓,陈龙.  中国热带医学. 2010(05)



本文编号：3123588