二甲双胍对去卵巢大鼠骨质疏松症和骨髓间充质干细胞骨向分化的影响及机制研究

发布时间：2021-04-16 05:02

　　背景:糖尿病性骨质疏松症（Diabetic osteoporosis,DOP）是由糖尿病并发骨质疏松导致的骨量减少,是糖尿病累及骨骼出现的严重并发症,该病严重影响着糖尿病患者的生存质量,二者之间的关系目前尚不明晰,如何能够有效地控制及治疗DOP已成为众多医务工作者和科研人员探讨的焦点及研究的课题。二甲双胍（Metformin,MF）是治疗2型糖尿病患者的一线用药,其在肿瘤、抗衰老、甲状腺疾病、骨质疏松症等领域的研究应用越来越受到重视。绝经期妇女雌激素缺乏会导致绝经后骨质疏松症,雌激素通过抑制破骨细胞的分化、成熟,促进成骨细胞的增殖、分化,从而对骨形成发挥保护作用。近年来研究发现MF除了发挥降糖作用以外,还表现出明显的成骨作用,MF的成骨作用涉及到多种细胞分子机制。一方面骨形态发生蛋白-2（Bone morphogenetic protein,BMP-2）和骨桥蛋白（Osteopontin,OPN）是成骨细胞分化、成熟的重要的因子,MF可通过激活磷酸腺苷酸活化蛋白激酶（Adenosine monophosphate-activated protein kinase,AMPK）代谢途径,增... 

【文章来源】：兰州大学甘肃省 211工程院校 985工程院校 教育部直属院校

【文章页数】：52 页

【学位级别】：硕士

【部分图文】：

各组大鼠BMD以及骨矿含量（x±s）

二甲双胍对去卵巢大鼠骨质疏松症和骨髓间充质干细胞兰州大学硕士学位论文骨向分化的影响及机制研究18传代的大鼠BMSCs加入诱导的培养基，经差速贴壁后呈小圆球形悬浮在培养液内在2-3h内开始贴壁(图2A)，接种3天后细胞呈梭形、纺锤型、多边形、三角形，并向外伸展出生长突，6-8天长满单层，部分细胞借突起相互连接，高密度区细胞逐步向成骨细胞形态转化(图2B)；生长突相互连接融合成片(图2C)，成骨细胞可呈多层重叠生长，并呈现钙化趋势，细胞基质分泌增多并包裹细胞，10-12天后出现较多的散在的致密的团块，并且逐渐增大，团块周边区域细胞密度程度高，而且细胞轮廓模糊，团块中心区逐渐变暗，透光性差，形成明显的结节(图2D)。图2传代培养的大鼠BMSCs诱导分化为成骨细胞的形态（×100）A：细胞培养后1天的大鼠BMSCs；B：细胞接种后3天；C：细胞接种后5天；D：加入矿化诱导液后12天3.2.2大鼠BMSCs在诱导培养基中的生长曲线传代大鼠BMSCs接种后1-3天内细胞增殖缓慢，此后细胞的增殖活性随着培养时间的增加而增加，第6天达到高峰，以后增长速度逐渐减慢，细胞数量开始下降(图3)。ABCD

二甲双胍对去卵巢大鼠骨质疏松症和骨髓间充质干细胞兰州大学硕士学位论文骨向分化的影响及机制研究19图3大鼠BMSCs分化为成骨细胞的生长曲线（MTT法）3.2.3大鼠BMSCs诱导分化为成骨细胞后矿化结节的形成在矿化诱导液的培养下，大鼠BMSCs分化为成骨细胞，多层重叠生长逐渐形成大小不一的结节，随着胶原沉积和基质矿化，最后形成密度不均匀不透光的矿化结节（图4A，B）。图4大鼠BMSCs分化为成骨细胞的鉴定A：骨细胞钙化中（诱导后14天）；B：骨细胞钙化形成（诱导后28天）3.2.4各组大鼠BMSCs分化为成骨细胞后细胞增殖、ALP活性与钙沉积量的变化为研究MF以及雌二醇是否会对去卵巢大鼠的BMSCs的细胞活性、ALP活性以及钙化能力产生影响，培养各组大鼠的BMSCs并诱导其向成骨细胞分化(图5)。与SHAM组比较，OVX组成骨细胞的增殖能力、ALP活性明显被抑制,钙沉积量明显减少（P<0.05）；与OVX组比较，在给予MF和雌二醇干预后显著增强了去卵巢大鼠成骨细胞的增殖能力以及ALP活性，钙沉积量显著增加(均AB


本文编号：3140796