EV-D68诱导的细胞凋亡机制及Caspase-3抑制剂的保护作用
发布时间：2021-04-28 01:27
人肠道病毒68型（EV-D68）是肠道病毒D组成员,被发现与多种疾病有关,主要引起呼吸系统疾病及神经系统并发症。近十年来,在全球多个国家和地区频繁报道EV-D68的爆发流行。目前对感染EV-D68患者的主要治疗手段为支持性治疗,没有针对病毒的特效治疗药物,也没有疫苗预防EV-D68的爆发。肠道病毒与细胞凋亡密切相关,含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶（Caspase）是细胞凋亡发生的重要蛋白,其中Caspase-3是细胞凋亡过程中最主要的终末剪切酶。那么EV-D68是否通过Caspase通路诱导细胞凋亡,其机制怎样?与宿主细胞的相互作用关系怎样?Caspase-3抑制剂（Z-DEVD-FMK）是否还能起到抑制病毒增殖的作用?本研究即致力于说明这些问题。实验方法:首先,探讨EV-D68导致的细胞病变效应是否为凋亡,以RD细胞作为观察对象,通过细胞形态学、Hoechst核染色、PI染色、DNA ladder、Western Blot等分析发生病变效应时的细胞状态、DNA降解的特征以及细胞内病毒蛋白vp1和活性Caspase-3蛋白表达情况。然后,分析Caspase-3抑制剂对感染EV-D68的...
【文章来源】：吉林大学吉林省 211工程院校 985工程院校 教育部直属院校
【文章页数】：69 页
【学位级别】：硕士
【文章目录】：
前言
摘要
Abstract
缩略词表
第1章 绪论
1.1 肠道病毒EV-D68
1.1.1 肠道病毒及EV-D68背景简介
1.1.2 EV-D68的生物学特性
1.1.3 EV-D68的流行病学特点
1.1.4 EV-D68的临床表现及预防、诊断和治疗现状
1.1.5 小结
1.2 细胞凋亡
1.2.1 细胞凋亡的定义
1.2.2 细胞凋亡的分子机制
1.2.3 细胞凋亡与Caspase
1.2.4 小结
1.3 细胞凋亡与病毒感染
1.3.1 宿主通过细胞凋亡防御病毒
1.3.2 病毒通过细胞凋亡促进自身复制
1.3.3 肠道病毒诱导宿主细胞凋亡的研究现状
1.3.4 小结
第2章 材料和方法
2.1 实验材料
2.1.1 细胞株及病毒
2.1.2 主要实验仪器
2.1.3 主要试剂
2.1.4 主要抗体
2.1.5 引物
2.1.6 试液配方
2.2 实验方法
2.2.1 实验设计及分组
2.2.2 细胞培养、计数及观察
2.2.3 流式细胞术检测细胞周期
2.2.4 病毒扩增及滴度测定
2.2.5 Caspase-3/8/9抑制剂、Caspase-3激活剂干预宿主细胞
2.2.6 Caspase活性测定
2.2.7 凝胶电泳和免疫印迹(Western Blot)
2.2.8 实时荧光定量PCR（RT-qPCR）
2.2.9 琼脂糖凝胶电泳测定DNA梯度化（DNA ladder）
2.2.10 统计分析
第3章 结果与分析
3.1 EV-D68感染RD细胞诱导细胞凋亡
3.2 Caspase-3抑制剂(Z-DEVD-FMK)缓解EV-D68引起的细胞病变、G0/G1期阻滞以及Caspase-3的激活
3.2.1 Caspase-3抑制剂处理RD细胞的操作流程
3.2.2 Caspase-3抑制剂缓解EV-D68引起的细胞病变效应
3.2.3 Caspase-3抑制剂逆转EV-D68引起的宿主细胞G0/G1阻滞
3.2.4 Caspase-3抑制剂抑制EV-D68激活的宿主细胞Caspase-3活性及蛋白表达
3.3 Caspase-3抑制剂可减少EV-D68病毒粒子的产生
3.3.1 Caspase-3抑制剂对EV-D68进入宿主细胞及细胞内病毒基因组复制无影响
3.3.2 Caspase-3抑制剂影响EV-D68后期成熟
3.4 Caspase-3激活剂可增加EV-D68病毒粒子的产生
3.5 RD细胞中激活的Caspase-3被EV-D68用于自身的扩增
3.6 感染EV-D68激活Caspase-3是通过激活上游Caspase-8和Caspase-9 实现的
3.7 EV-D68在RD及 293T细胞系中可引起细胞病变效应,而在Vero和MRC5细胞系中无影响
第4章 讨论
第5章 结论与创新点
参考文献
作者简介及硕士期间取得的成果
致谢
本文编号：3164532
【文章来源】：吉林大学吉林省 211工程院校 985工程院校 教育部直属院校
【文章页数】：69 页
【学位级别】：硕士
【文章目录】：
前言
摘要
Abstract
缩略词表
第1章 绪论
1.1 肠道病毒EV-D68
1.1.1 肠道病毒及EV-D68背景简介
1.1.2 EV-D68的生物学特性
1.1.3 EV-D68的流行病学特点
1.1.4 EV-D68的临床表现及预防、诊断和治疗现状
1.1.5 小结
1.2 细胞凋亡
1.2.1 细胞凋亡的定义
1.2.2 细胞凋亡的分子机制
1.2.3 细胞凋亡与Caspase
1.2.4 小结
1.3 细胞凋亡与病毒感染
1.3.1 宿主通过细胞凋亡防御病毒
1.3.2 病毒通过细胞凋亡促进自身复制
1.3.3 肠道病毒诱导宿主细胞凋亡的研究现状
1.3.4 小结
第2章 材料和方法
2.1 实验材料
2.1.1 细胞株及病毒
2.1.2 主要实验仪器
2.1.3 主要试剂
2.1.4 主要抗体
2.1.5 引物
2.1.6 试液配方
2.2 实验方法
2.2.1 实验设计及分组
2.2.2 细胞培养、计数及观察
2.2.3 流式细胞术检测细胞周期
2.2.4 病毒扩增及滴度测定
2.2.5 Caspase-3/8/9抑制剂、Caspase-3激活剂干预宿主细胞
2.2.6 Caspase活性测定
2.2.7 凝胶电泳和免疫印迹(Western Blot)
2.2.8 实时荧光定量PCR（RT-qPCR）
2.2.9 琼脂糖凝胶电泳测定DNA梯度化（DNA ladder）
2.2.10 统计分析
第3章 结果与分析
3.1 EV-D68感染RD细胞诱导细胞凋亡
3.2 Caspase-3抑制剂(Z-DEVD-FMK)缓解EV-D68引起的细胞病变、G0/G1期阻滞以及Caspase-3的激活
3.2.1 Caspase-3抑制剂处理RD细胞的操作流程
3.2.2 Caspase-3抑制剂缓解EV-D68引起的细胞病变效应
3.2.3 Caspase-3抑制剂逆转EV-D68引起的宿主细胞G0/G1阻滞
3.2.4 Caspase-3抑制剂抑制EV-D68激活的宿主细胞Caspase-3活性及蛋白表达
3.3 Caspase-3抑制剂可减少EV-D68病毒粒子的产生
3.3.1 Caspase-3抑制剂对EV-D68进入宿主细胞及细胞内病毒基因组复制无影响
3.3.2 Caspase-3抑制剂影响EV-D68后期成熟
3.4 Caspase-3激活剂可增加EV-D68病毒粒子的产生
3.5 RD细胞中激活的Caspase-3被EV-D68用于自身的扩增
3.6 感染EV-D68激活Caspase-3是通过激活上游Caspase-8和Caspase-9 实现的
3.7 EV-D68在RD及 293T细胞系中可引起细胞病变效应,而在Vero和MRC5细胞系中无影响
第4章 讨论
第5章 结论与创新点
参考文献
作者简介及硕士期间取得的成果
致谢
本文编号：3164532
本文链接：https://www.wllwen.com/yixuelunwen/yiyaoxuelunwen/3164532.html
最近更新
教材专著
