苯海索对OGD后体外血脑屏障上P-gp变化的影响

发布时间：2021-05-15 08:48

　　目的:探索苯海索（trihexyphenidyl,THP）对氧糖剥夺（oxygen glucose deprivation,OGD）后体外血脑屏障（blood brain barrier,BBB）上P-糖蛋白（P-glycoprotein,P-gp）变化的影响及机制研究。方法:（1）原代培养大鼠脑微血管内皮细胞（rat brain microvascular endothelial cells,r BMECs）和星形胶质细胞,免疫荧光染色法鉴别r BMECs;采用MTT法检测不同时间OGD对r BMECs的细胞存活率影响,通过Transwell建立共培养体系模拟体外BBB,每天监测共培养体系跨膜电阻值（transendothelial electrical resistance,TEER）,待其达到稳定后进行后续实验;通过测定由内室到外室荧光素钠（fluorescein sodium,Na F）转运的表观渗透系数（apparent permeability coefficient,Papp）研究不同时间OGD损伤r BMECs后对BBB紧密连接的影响;再分别测定共培养体系罗丹明123（... 

【文章来源】：河南大学河南省

【文章页数】：76 页

【学位级别】：硕士

【文章目录】：
摘要
ABSTRACT
前言
第一章 体外血脑屏障损伤模型的建立
    1 引言
    2 实验材料
        2.1 实验动物
        2.2 实验试剂及配制
        2.3 主要仪器
    3 实验方法
        3.1 r BMECs和星形胶质细胞的提取、分离及培养
        3.2 免疫荧光染色法鉴别r BMECs
        3.3 不同时间OGD对 r BMECs的损伤
        3.4 体外BBB模型的建立
        3.5 不同时间OGD损伤r BMECs对共培养体系由内室到外室Na F转运的影响
        3.6 不同时间OGD损伤r BMECs对共培养体系Rh123 转运的影响
        3.7 Western Blot检测OGD损伤后r BMECs上 P-gp的表达
        3.8 免疫荧光染色法检测OGD损伤后对星形胶质细胞的激活
        3.9 统计学分析
    4 结果
        4.1 r BMECs的纯化与鉴别
        4.2 体外BBB模型的建立
        4.3 不同时间OGD对 r BMECs的活力影响
        4.4 不同时间OGD损伤r BMECs对共培养体系由内室到外室Na F转运的影响
        4.5 不同时间OGD损伤r BMECs对共培养体系Rh123 转运的影响
        4.6 Western Blot检测OGD损伤后r BMECs上 P-gp的表达
        4.7 免疫荧光染色法检测OGD损伤后对星形胶质细胞的激活
    5 讨论
    6 小结
第二章 THP对 OGD后体外血脑屏障上P-gp的影响
    1 引言
    2 实验材料
        2.1 实验试剂及配制
        2.2 主要仪器
    3 实验方法
        3.1 r BMECs和星形胶质细胞的提取、分离及培养
        3.2 THP对 r BMECs细胞活力的影响
        3.3 THP对 OGD损伤后r BMECs细胞存活率的影响
        3.4 THP对 OGD损伤后r BMECs细胞形态学的影响
        3.5 体外BBB模型的构建
        3.6 THP对 OGD损伤后共培养体系由内室到外室Na F转运的影响
        3.7 THP对 OGD损伤后共培养体系Rh123 转运的影响
        3.8 Western Blot检测THP对 OGD损伤后r BMECs上 P-gp蛋白表达的影响
        3.9 THP对 OGD损伤后r BMECs内的氧化应激相关指标的影响
        3.10 统计学分析
    4 结果
        4.1 THP对 r BMECs的细胞毒性测定
        4.2 THP提高OGD损伤后r BMECs细胞存活率
        4.3 THP改善OGD损伤后r BMECs细胞形态学变化
        4.4 THP降低OGD损伤后共培养体系由内室到外室Na F的转运
        4.5 THP改善OGD损伤后共培养体系Rh123 的转运
        4.6 THP抑制OGD损伤后r BMECs上 P-gp蛋白表达
        4.7 THP对 OGD损伤后r BMECs内的氧化应激相关指标的测定
    5 讨论
    6 小结
第三章 THP对 OGD后体外血脑屏障上P-gp影响的机制研究
    1 引言
    2 实验材料
        2.1 实验试剂及配制
        2.2 主要仪器
    3 实验方法
        3.1 免疫荧光法检测THP对 OGD损伤后r BMECs紧密连接和P-gp相关蛋白的表达
        3.2 Western Blot检测THP对 OGD损伤后r BMECs紧密连接和P-gp相关蛋白的表达
        3.3 各因子抑制剂对r BMECs细胞活力的影响
        3.4 Western Blot检测各抑制剂对r BMECs内 P-gp相关蛋白的表达
        3.5 统计学分析
    4 实验结果
        4.1 THP对 OGD后体外血脑屏障结构损伤的修复作用
        4.2 THP抑制OGD损伤后r BMECs上 P-gp相关蛋白的表达
        4.3 各因子抑制剂对r BMECs细胞活力的影响
        4.4 THP对 OGD后体外血脑屏障上P-gp的作用调节机制
    5 讨论
    6 小结
文献综述:P-糖蛋白在中枢神经系统疾病中的作用研究
参考文献
附录
致谢


【参考文献】：
期刊论文
[1]苯海索对局灶性脑缺血-再灌注大鼠大脑皮质Ca2+含量、海马c-fos、c-sis基因表达的影响[J]. 谢松强,杨保华,姬汴生,胡香杰,张贵卿.  中南药学. 2004(05)
[2]苯海索对培养神经细胞谷氨酸兴奋毒性的保护作用[J]. 姬汴生,高远,刘红,胡香杰,张贵卿.  中国药学杂志. 2002(09)



本文编号：3187341