基于NF-κB报告基因模型的抗肿瘤成分筛选及机制研究

发布时间：2021-06-02 20:32

　　目的:构建基于报告基因靶向NF-κB信号通路的抑制剂高通量筛选模型,筛选得到基于NF-κB信号通路的抗肿瘤活性成分,进而探讨活性成分的抗肿瘤机制及联合给药情况。方法:1、将pNF-κB-luc报告基因质粒、内参海肾荧光素酶质粒转染到Hek293细胞中,考察不同给药剂量、给药时间、转染浓度等试验参数对报告基因模型构建的影响,构建双荧光素酶报告基因模型,以NF-κB的抑制剂PDTC为阳性药,筛选基于LPS诱导激活的NF-κB通路抑制剂。2、筛选得到的活性成分,采用CCK-8法测定竹节香附素A（RDA）的细胞毒性,计算IC₅₀。免疫荧光法研究RDA对NF-κB p65及NF-κB p50的激活-核转运情况,RT-PCR技术研究RDA对于NF-κB通路中mRNA转录的影响;Western Blot技术检测RDA对NF-κB通路中活性蛋白NF-κBp65、IκBα、MAPKP38、JNK表达的变化。3、CCK-8法检测地西他滨与RDA联合给药对QGY-7703肝癌细胞的抑制作用;Transwell实验研究RDA与地西他滨联合给药对QGY-7703细胞侵袭、迁移的影响;Ann... 

【文章来源】：长春中医药大学吉林省

【文章页数】：68 页

【学位级别】：硕士

【部分图文】：

NF-κB作用机制（摘自维基百科）

Hek293T细胞（A为胰酶消化后的细胞，B是贴壁生长的细胞）

不同细胞系考察结果

【参考文献】：
期刊论文
[1]竹节香附素A对人结肠癌细胞HCT-116增殖、凋亡、迁移及侵袭活性的影响[J]. 王宇,姜修博,韩豆,朱志铭,宋长琴,赵昂,张琪,刘昌辉,马博.  中药新药与临床药理. 2018(02)
[2]NF-κB信号通路蛋白在木脂素对胃癌SGC-7901细胞抗增殖作用中的机制研究[J]. 焦璐,王莹,吕游,李柱虎.  时珍国医国药. 2017(10)
[3]Aberrant control of NF-κB in cancer permits transcriptional and phenotypic plasticity, to curtail dependence on host tissue: molecular mode[J]. Spiros A.Vlahopoulos.  Cancer Biology & Medicine. 2017(03)
[4]中药抗肿瘤有效成分研究进展[J]. 项谦.  黑龙江医药. 2015(03)
[5]基于报告基因检测的PXR、FXR和LXRα激动剂高通量筛选模型的建立[J]. 庄嘉琅,曾行,钟国平,金晶,苟晓丽,毕惠嫦,黄民.  中国药理学通报. 2015(02)

博士论文
[1]溃结灵对NF-кB活化的IκBα磷酸化/泛素化的作用机制研究[D]. 唐立海.广州中医药大学 2012

硕士论文
[1]双荧光素酶报告基因检测miR-185与AKT1靶标关系[D]. 曹大龙.蚌埠医学院 2015
[2]基于报告基因靶向NF-κB通路的抑制剂筛选及抗肿瘤活性研究[D]. 王秀娥.中国海洋大学 2012
[3]NF-κB p65亚基DNA结合域相互作用多肽的筛选及其功能鉴定[D]. 徐祥.第三军医大学 2002



本文编号：3210704