体外心肌毒性代谢组学样品预处理及UPLC/Q-TOF-MS条件优化

发布时间：2021-06-07 22:07

　　目的筛选最佳的体外原代心肌（PC）细胞代谢组学样品预处理方法,对超高效液相色谱-飞行时间质谱联用技术（UPLC/Q-TOF-MS）的色谱-质谱条件优化,为建立体外心肌毒性代谢组学研究方法奠定基础。方法利用UPLC/Q-TOF-MS技术,分别考察0.05%胰酶消化后冰甲醇提取和刮刀刮取后6种不同溶剂提取的心肌细胞样品预处理方法,考察5种流动相梯度洗脱方案和正、负离子检测模式下的基峰离子流图,利用质量控制样本（QC）进行仪器精密度、方法精密度和样本稳定性试验等方法学考察。结果最佳的心肌细胞样品预处理方法为:0.05%胰蛋白酶-0.02%EDTA消化后-80℃甲醇直接提取。最佳的流动相洗脱程序为:0 min,2.0%A;2 min,25.0%A;6 min,40.0%A;12 min,90.0%A;保持2 min;16 min,2.0%A;保持2 min。最佳的质谱检测模式为:正离子模式。本方法的仪器精密度、方法精密度和样本稳定性试验以相对峰面积比值的RSD计分别为4.9%¹4.9%、8.6%¹7.8%和5.2%¹6.3%,以... 

【文章来源】：药物评价研究. 2016,39(04)

【文章页数】：8 页

【部分图文】：

心肌细胞样品预处理方法考察

568DrugEvaluationResearch第39卷第4期2016年8月3.2色谱条件中梯度洗脱程序的优化利用“2.2.1”项方法制备的心肌细胞样品在正离子模式下进行梯度洗脱程序优化，考察表1中的5种梯度洗脱程序，与其余4种梯度洗脱程序比较，程序5可获得最多数目的特征峰，且其BPI图中各特征峰分离度和峰形均较好，因此，选择程序5为最佳洗脱程序。5种梯度洗脱程序的BPI图见图2。1.002.003.004.005.006.007.008.009.0010.0011.0012.0013.0014.0015.0016.0100200300400006000080090010001100120013001400100160100200300400500600700800900100011001200130014001500160图2UPLC/Q-TOF-MS梯度洗脱程序的选择Fig.2GradientelutionprogramselectionforUPLC/Q-TOF-MS1.002.003.004.005.006.007.008.009.0010.0011.0012.0013.0014.0015.00t/min1.002.003.004.005.006.007.008.009.0010.0011.0012.0013.0014.0015.00t/min1.002.003.004.005.006.007.008.009.0010.0011.0012.0013.0014.0015.00t/min1.002.003.004.005.006.007.008.009.0010.0011.0012.0013.0014.0015.00t/min1.002.003.004.005.006.007.008.009.0010.0011.0012.0013.0014.0015.00t/min程序1程序2程序3程序4程序5

DrugEvaluationResearch第39卷第4期2016年8月5693.3质谱条件中正负检测模式的选择在梯度洗脱程序4的条件下，考察“2.2.1”项方法制备的心肌细胞样品在正、负离子模式检测下的出峰情况，结果显示，在正离子模式下检测到了＞20个特征峰，而负离子模式只检测到了少数几个特征峰。因此，统一采用正离子模式检测。结果见图3。3.4方法学考察结果6个稳定出现的较大共有独立峰色谱图见图4。仪器精密度中相对峰面积比值的RSD为4.9%～14.9%，保留时间的RSD均小于1.0%，表明仪器精密度良好；方法精密度中相对峰面积比值的RSD为8.6%～17.8%，保留时间的RSD均小于1.0%，表明方法精密度良好；样品稳定性试验中相对峰面积比值的RSD为5.2%～16.3%，保留时间的RSD均小于1.0%，表明样品在48h内稳定，所以每批样品应保证在2d内测定。结果见表2。图3质谱检测离子模式选择Fig.3Ionmodeselectionformassspectrometrydetection图4方法学考察所用的6个色谱峰Fig.4Sixchromatographicpeaksindicatedinmethodologicalevaluation表2仪器精密度、方法精密度和稳定性实验结果(n=5)Table2Resultsofinstrumentprecision,methodprecision,andstabilitytests(n=5)分子离子峰相对峰面积保留时间仪器精密度RSD/%方法精密度RSD/%稳定性RSD/%仪器精密度RSD/%方法精密度RSD/%稳定性RSD/%峰A4.910.515.30.30.30.4峰B6.59.19.20.30.30.2峰C10.39.215.00.20.20.2峰D8.58.65.20.10.10.1峰E13.017.812.70.10.10.1峰F14.910.916.30.10.10.11.002.003.004.005.006.007.008.009.0010.0011.0012.0013.0014.0015.00t/min1.002.003.004.005.006.007.008.009.0010.0011.0012.0013.0014.0015.00t/minES+ES1.002.003.004.005.006.007.008.

【参考文献】：
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博士论文
[1]应用基于质谱技术的代谢组学研究肝损伤标志物[D]. 林艳萍.天津大学 2009



本文编号：3217400