Parkin通过调控线粒体自噬参与阿霉素诱导的心肌毒性分子机制研究

发布时间：2021-06-12 02:23

　　目的:阿霉素（Doxorubicin,DOX）是一种广泛使用的抗肿瘤药物,但其对心脏产生副作用,因此在临床应用上受到一定的限制。已提出多种阿霉素诱导的不可逆性心肌损伤机制,包括活性氧产生,脂质过氧化和线粒体功能障碍等。在这些病理因素中,线粒体功能障碍被认为是阿霉素诱导心肌毒性的关键靶点。Parkin通过介导线粒体自噬参与对细胞内受损线粒体的选择性清除,对维持细胞内环境稳态和线粒体正常形态结构具有重要作用。此外,YAP的靶蛋白为Parkin,并且越来越多的证据表明YAP（Yes-associated protein）与心脏发育、细胞增殖和心肌梗死等心脏疾病相关,但是否与心肌毒性相关并没有报道。因此,本研究旨在确定YAP/Parkin介导线粒体自噬是否调控阿霉素诱导的心肌毒性并探索其潜在机制。方法:6只8周龄健康纯种雄性小鼠和6只8周龄健康的Parkin转基因雄性小鼠,通过注射阿霉素制作心肌毒性机制的小鼠模型（模型组）,6只8周龄健康纯种雄性小鼠和6只8周龄健康的Parkin转基因雄性小鼠,通过注射生理盐水作为对照组。通过TUNEL（terminal deoxinucleotidyl tr... 

【文章来源】：青岛大学山东省

【文章页数】：53 页

【学位级别】：硕士

【部分图文】：

DOX在心肌细胞中诱导线粒体分裂和线粒体自噬（a-d）心肌细胞H9c2在DOX处理后诱导心肌毒性

图 2 Parkin 调节 DOX 诱导的线粒体分裂和线粒体自噬（a-b）用 2 μM DOX 处理心肌细胞 24 小时，分别通过免疫印迹和 RT-PCR 检测 Parkin 蛋白水平（a）和 mRNA 水平（b）。（c-g）用 Parkin 过表达腺病毒和对照β-gal 感染心肌细胞。感染 24 小时后，再用 2 μM DOX 处理细胞 24 小时。收集细胞用于检测 Parkin 表达水平（c）线粒体分裂（d）凋亡（e）自噬流（f）和 LC3 蛋白水平（g）。代表性照片显示线粒体分裂（d，左）。蓝色，DAPI 染色的细胞核; 红色，MitoTracker 红色 CMXRos 染色的线粒体。比例尺，10 μm。计数并总结了经历线粒体分裂的细胞百分比（d，右）。TUNEL 测定用于检测凋亡细胞。比例尺，50 μm。此外，用腺病毒 RFP-GFP-LC3，Parkin 和β-gal 感染心肌细胞。在感染后 24 小时，再用2 μM DOX 处理细胞，然后在处理后 24 小时后，收集细胞用于检测自噬通量（f，左）。比例尺，10 μm。（f，右）定量分析心肌细胞中的自噬体（AP;白色），自溶酶体（AL;黑色）和两者（AP +AL;灰色）。（g）LC3II 蛋白水平用于检测线粒体自噬。与对照组比较，数据表示为三次独立实验的平均值±SD,*P＜0.05。

17图 3 Parkin 敲低对 DOX 诱导的心脏毒性敏感性增强（a-e）使用 Parkin siRNA 的腺病毒感染心肌细胞，检测 Parkin 的表达水平（a），同时加入DOX（0.2 μM）观察线粒体分裂（b）细胞凋亡（c）和 LC3II 蛋白水平（d）。 代表性的照片显示线粒体分裂（b，左）。蓝色，DAPI 染色的细胞核; 红色，MitoTracker 红色 CMXRos 染色的线粒体。比例尺，10 μm。计数并总结了经历线粒体分裂的细胞百分比（b，右）。TUNEL 测定用于检测凋亡的细胞。比例尺，50 μm。（d）LC3II 蛋白水平用于检测线粒体自噬。与对照组比较，数据表示为三次独立实验的平均值±SD,*P＜0.05。

【参考文献】：
期刊论文
[1]过表达前脑啡肽原（PPENK）增强线粒体自噬减轻大鼠心肌缺血再灌注损伤[J]. 王艳,卢晓娥,赵品,姜静,姚立农.  细胞与分子免疫学杂志. 2017(10)
[2]An emerging role for Hippo-YAP signaling in cardiovascular development[J]. Jiliang Zhou.  The Journal of Biomedical Research. 2014(04)



本文编号：3225757