川芎嗪茋类衍生物DLJ14和阿霉素合用抑制MCF-7/A细胞体内外增殖作用的机制研究

发布时间：2021-06-19 14:08

　　川芎嗪（tetramethylpyrazine,TMP）是伞形科蒿本属植物川芎Ligusticum chuanxiong Hort根茎中分离提纯的一种生物碱为中药川芎的有效活性成分之一。目前已有很多文献报道TMP具有逆转肿瘤多药耐药的活性,但由于甲基易被氧化而导致其半衰期短、生物利用度低,限制其临床应用。为了克服其缺点,我们合成了一系列川芎嗪芪类衍生物并筛选出具有较好活性的DLJ14（（E）-2-（2,4,-二甲氧基苯乙烯基）-3,5,6-三甲基吡嗪）。前期实验结果已经证实：DLJ14能逆转人慢性粒细胞性白血病耐阿霉素细胞株K562/A02和人乳腺癌耐阿霉素细胞株MCF-7/A对阿霉素的耐药性。但是,DLJ14和阿霉素合用后提高阿霉素抗肿瘤作用的机制并没有完全阐明。本课题将进一步探讨川芎嗪芪类衍生物DLJ14和阿霉素合用对人乳腺癌耐阿霉素细胞MCF-7/A体内外增殖的抑制作用及作用机制。首先,体外MTT实验表明：DLJ14和阿霉素合用能明显增强对MCF-7/A细胞的抑制作用,与阿霉素单用组比较有显著性差异。体内裸鼠荷瘤实验表明：与阴性对照组相比,DLJ14单用（4mg/kg,8mg/k... 

【文章来源】：山东大学山东省 211工程院校 985工程院校 教育部直属院校

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【学位级别】：硕士

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中文摘要
ABSTRACT
符号说明
前言
    1. 凋亡通路阻滞与MDR
        1.1. 内源性细胞凋亡途径
        1.2. 外源性细胞凋亡途径
        1.3. 内源性细胞凋亡途径与外源性细胞凋亡途径的相互联系
    2. 细胞表面ABC超家族药泵蛋白外排与MDR
实验材料
    1. 化合物
    2. 细胞株及其培养
    3. 实验动物
    4. 试剂
    5. 仪器设备
实验方法
    1. DLJ14和阿霉素合用对MCF-7/A细胞线粒体凋亡通路的影响
        1.1. 肿瘤细胞生长抑制实验
        1.2. 裸鼠皮下移植瘤生长抑制实验
        1.3. Hoechst 33258染色实验
        1.4. Annexin-FITCV/PI双染法检测细胞凋亡实验
        1.5. 细胞周期检测
        1.6. 线粒体膜电位检测
        1.7. 细胞线粒体蛋白和胞浆蛋白的分离提取
        1.8. Western blotting法检测相关蛋白的表达
    2. DLJ14和阿霉素合用对MCF-7/A细胞中ABC超家族耐药相关蛋白P-gp和BCRP的影响
        2.1. 罗丹明123的胞内蓄积
        2.2. 细胞内ATP含量检测
        2.3. ATPase活性测定
        2.4. Western blotting法检测P-gp和BCRP蛋白的表达
数据分析
实验结果
    1. DLJ14和阿霉素合用对MCF-7/A细胞线粒体凋亡通路的影响
        1.1. DLJ14增强阿霉素对耐阿霉素细胞株MCF-7/A体外生长的抑制作用
        1.2. DLJ14增强阿霉素对耐阿霉素细胞株MCF-7/A裸鼠体内移植瘤生长的抑制作用
        1.3. DLJ14增强阿霉素对EGFR/PI3K/Akt细胞信号通路的抑制作用
        1.4. Hoechst 33258染色法检测DLJ14与阿霉素合用诱导MCF-7/A细胞凋亡的形态学变化
        1.5. Annexin V-FITC/PI染色法检测DLJ14与阿霉素合用诱导MCF-7/A细胞凋亡的作用
        1.6. DLJ14与阿霉素合用后影响MCF-7/A细胞凋亡相关蛋白的表达
        1.7. DLJ14增强阿霉素诱导MCF-7/A细胞G2/M期阻滞作用
        1.8. DLJ14增强阿霉素诱导MCF-7/A细胞线粒体膜电位下降,促进cytochrome c从线粒体释放到胞浆
    2. DLJ14和阿霉素合用对MCF-7/A细胞中ABC超家族耐药相关蛋白P-gp和BCRP表达的影响
        2.1. DLJ14和阿霉素合用增加罗丹明123的胞内蓄积
        2.2. DLJ14和阿霉素合用降低MCF-7/A细胞内ATP含量
        2.3. DLJ14和阿霉素合用降低MCF-7/A细胞中Ca~(2+)-Mg~(2+)ATPase活性
        2.4. DLJ14和阿霉素合用降低MCF-7/A细胞中P-gp和BCRP蛋白的表达
        2.5. DLJ14和阿霉素合用降低MCF-7/A细胞中ERK和P-ERK蛋白的表达
讨论
结论
参考文献
致谢
攻读硕士学位期间发表论文
学位论文评阅及答辩情况表


【参考文献】：
期刊论文
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本文编号：3237957