不同MEK1/2抑制剂对NF1敲低的施万细胞增殖活性的影响
发布时间：2021-06-22 22:39
目的:构建慢病毒干扰载体介导的NF1敲低RSC96(NF1kdRSC96)施万细胞株,对比不同MEK1/2抑制剂对该稳转细胞株增殖的影响。方法:运用慢病毒干扰载体构建NF1kd的施万细胞模型,采用q RT-PCR及Western免疫印迹验证慢病毒干扰载体组(NF1kd组)和空白载体组的NF1表达水平;应用5种MEK1/2抑制剂,包括司美替尼（Selumetinib）、贝美替尼（Binimetinib）、考比替尼（Cobimetinib）、曲美替尼（Trametinib）、PD0325901处理细胞,CCK-8法检测不同MEK1/2抑制剂在时间梯度和浓度梯度下的抑制作用。使用Graphpad Prism 5计算NF1kd组和空白载体组中5种抑制剂的半抑制浓度(IC50)值,采用SPSS 22.0软件包对数据进行统计学分析。结果:5种MEK1/2抑制剂均对NF1kd施万细胞的增殖有抑制作用（P<0.05）。72 h时,PD0325901、Cobimeti...
【文章来源】：中国口腔颌面外科杂志. 2020,18(04)
【文章页数】：6 页
【部分图文】：
沉默NF1表达的施万细胞模型。A.shNF1-RSC96细胞株荧光密度观察；B.NF1基因的mRNA水平检测；C.NF1蛋白水平检测；D.NF1敲减后RAS-MAPK通路变化
图1 沉默NF1表达的施万细胞模型。A.shNF1-RSC96细胞株荧光密度观察；B.NF1基因的mRNA水平检测；C.NF1蛋白水平检测；D.NF1敲减后RAS-MAPK通路变化目前已用于肿瘤治疗的MEK抑制剂种类较多，由于各种MEK抑制剂的分子结构不同，存在对MEK位点的选择性及上、下游RAF、ERK等敏感性不同，对各种肿瘤的临床治疗效果也各异。本研究使用慢病毒干扰载体构建NF1基因低表达的RSC96施万细胞系，模拟疾病状态下NF1基因突变的功能下调。选用4种与Selumetinib作用位点相近的MEK1/2抑制剂，对比时间梯度和半数抑制浓度方面的药效差异。实验结果显示，5种MEK抑制剂均能抑制NF1kd施万细胞的增殖活性。其中，PD0325901、Cobimetinib、Trametinib在72 h时仍有显著抑制效果，而Selumetini和Binimetinib在72 h时抑制效果明显减弱。半数抑制浓度实验中，Cobimetinib和Binimetnib以更低的药物浓度抑制NF1kd细胞增殖，有效区分了对照组细胞和NF1kd组细胞，组间差异明显，表现出杀伤肿瘤细胞的敏感性。综合实验结果，Cobimetinib不仅具有长效的抑制作用，同时具有特异性杀伤NF1kd施万细胞的能力，有一定的潜在治疗优势。但是，以MEK为靶点的药物一般会导致皮疹、肌酸激酶升高、心脏射血分数下降等副作用。在既往临床研究中，Trametinib发生的3～4级不良事件为皮疹（16/211）、疲倦（8/211）、高血压（26/211）等[20];Binimetinib发生的3～4级不良事件为痤疮样皮炎（4/71）、肌酸磷酸激酶升高（14/71）、腹泻（4/71）、小肠穿孔（1/71)[21]。Cobimetinib单独用药时耐受较好，发生的3～4级不良事件为腹泻（7/97）、皮疹（6/97）、疲倦（5/97)[22],2015年被FDA批准联合Vemurafenib治疗BRAF V600E或V600K突变阳性、不可切除性或转移性黑色素瘤。因此，Cobimetinib可能是临床治疗NF1的潜在靶向药物。
目前已用于肿瘤治疗的MEK抑制剂种类较多，由于各种MEK抑制剂的分子结构不同，存在对MEK位点的选择性及上、下游RAF、ERK等敏感性不同，对各种肿瘤的临床治疗效果也各异。本研究使用慢病毒干扰载体构建NF1基因低表达的RSC96施万细胞系，模拟疾病状态下NF1基因突变的功能下调。选用4种与Selumetinib作用位点相近的MEK1/2抑制剂，对比时间梯度和半数抑制浓度方面的药效差异。实验结果显示，5种MEK抑制剂均能抑制NF1kd施万细胞的增殖活性。其中，PD0325901、Cobimetinib、Trametinib在72 h时仍有显著抑制效果，而Selumetini和Binimetinib在72 h时抑制效果明显减弱。半数抑制浓度实验中，Cobimetinib和Binimetnib以更低的药物浓度抑制NF1kd细胞增殖，有效区分了对照组细胞和NF1kd组细胞，组间差异明显，表现出杀伤肿瘤细胞的敏感性。综合实验结果，Cobimetinib不仅具有长效的抑制作用，同时具有特异性杀伤NF1kd施万细胞的能力，有一定的潜在治疗优势。但是，以MEK为靶点的药物一般会导致皮疹、肌酸激酶升高、心脏射血分数下降等副作用。在既往临床研究中，Trametinib发生的3～4级不良事件为皮疹（16/211）、疲倦（8/211）、高血压（26/211）等[20];Binimetinib发生的3～4级不良事件为痤疮样皮炎（4/71）、肌酸磷酸激酶升高（14/71）、腹泻（4/71）、小肠穿孔（1/71)[21]。Cobimetinib单独用药时耐受较好，发生的3～4级不良事件为腹泻（7/97）、皮疹（6/97）、疲倦（5/97)[22],2015年被FDA批准联合Vemurafenib治疗BRAF V600E或V600K突变阳性、不可切除性或转移性黑色素瘤。因此，Cobimetinib可能是临床治疗NF1的潜在靶向药物。总之，本研究通过构建NF1kd施万细胞稳转细胞系，在药效持久性和杀伤特异性方面，初步探讨了不同MEK1/2抑制剂对NF1kd施万细胞的作用差异，为神经纤维瘤的靶向药物选择提供了实验依据。
本文编号：3243661
【文章来源】：中国口腔颌面外科杂志. 2020,18(04)
【文章页数】：6 页
【部分图文】：
沉默NF1表达的施万细胞模型。A.shNF1-RSC96细胞株荧光密度观察；B.NF1基因的mRNA水平检测；C.NF1蛋白水平检测；D.NF1敲减后RAS-MAPK通路变化
图1 沉默NF1表达的施万细胞模型。A.shNF1-RSC96细胞株荧光密度观察；B.NF1基因的mRNA水平检测；C.NF1蛋白水平检测；D.NF1敲减后RAS-MAPK通路变化目前已用于肿瘤治疗的MEK抑制剂种类较多，由于各种MEK抑制剂的分子结构不同，存在对MEK位点的选择性及上、下游RAF、ERK等敏感性不同，对各种肿瘤的临床治疗效果也各异。本研究使用慢病毒干扰载体构建NF1基因低表达的RSC96施万细胞系，模拟疾病状态下NF1基因突变的功能下调。选用4种与Selumetinib作用位点相近的MEK1/2抑制剂，对比时间梯度和半数抑制浓度方面的药效差异。实验结果显示，5种MEK抑制剂均能抑制NF1kd施万细胞的增殖活性。其中，PD0325901、Cobimetinib、Trametinib在72 h时仍有显著抑制效果，而Selumetini和Binimetinib在72 h时抑制效果明显减弱。半数抑制浓度实验中，Cobimetinib和Binimetnib以更低的药物浓度抑制NF1kd细胞增殖，有效区分了对照组细胞和NF1kd组细胞，组间差异明显，表现出杀伤肿瘤细胞的敏感性。综合实验结果，Cobimetinib不仅具有长效的抑制作用，同时具有特异性杀伤NF1kd施万细胞的能力，有一定的潜在治疗优势。但是，以MEK为靶点的药物一般会导致皮疹、肌酸激酶升高、心脏射血分数下降等副作用。在既往临床研究中，Trametinib发生的3～4级不良事件为皮疹（16/211）、疲倦（8/211）、高血压（26/211）等[20];Binimetinib发生的3～4级不良事件为痤疮样皮炎（4/71）、肌酸磷酸激酶升高（14/71）、腹泻（4/71）、小肠穿孔（1/71)[21]。Cobimetinib单独用药时耐受较好，发生的3～4级不良事件为腹泻（7/97）、皮疹（6/97）、疲倦（5/97)[22],2015年被FDA批准联合Vemurafenib治疗BRAF V600E或V600K突变阳性、不可切除性或转移性黑色素瘤。因此，Cobimetinib可能是临床治疗NF1的潜在靶向药物。
目前已用于肿瘤治疗的MEK抑制剂种类较多，由于各种MEK抑制剂的分子结构不同，存在对MEK位点的选择性及上、下游RAF、ERK等敏感性不同，对各种肿瘤的临床治疗效果也各异。本研究使用慢病毒干扰载体构建NF1基因低表达的RSC96施万细胞系，模拟疾病状态下NF1基因突变的功能下调。选用4种与Selumetinib作用位点相近的MEK1/2抑制剂，对比时间梯度和半数抑制浓度方面的药效差异。实验结果显示，5种MEK抑制剂均能抑制NF1kd施万细胞的增殖活性。其中，PD0325901、Cobimetinib、Trametinib在72 h时仍有显著抑制效果，而Selumetini和Binimetinib在72 h时抑制效果明显减弱。半数抑制浓度实验中，Cobimetinib和Binimetnib以更低的药物浓度抑制NF1kd细胞增殖，有效区分了对照组细胞和NF1kd组细胞，组间差异明显，表现出杀伤肿瘤细胞的敏感性。综合实验结果，Cobimetinib不仅具有长效的抑制作用，同时具有特异性杀伤NF1kd施万细胞的能力，有一定的潜在治疗优势。但是，以MEK为靶点的药物一般会导致皮疹、肌酸激酶升高、心脏射血分数下降等副作用。在既往临床研究中，Trametinib发生的3～4级不良事件为皮疹（16/211）、疲倦（8/211）、高血压（26/211）等[20];Binimetinib发生的3～4级不良事件为痤疮样皮炎（4/71）、肌酸磷酸激酶升高（14/71）、腹泻（4/71）、小肠穿孔（1/71)[21]。Cobimetinib单独用药时耐受较好，发生的3～4级不良事件为腹泻（7/97）、皮疹（6/97）、疲倦（5/97)[22],2015年被FDA批准联合Vemurafenib治疗BRAF V600E或V600K突变阳性、不可切除性或转移性黑色素瘤。因此，Cobimetinib可能是临床治疗NF1的潜在靶向药物。总之，本研究通过构建NF1kd施万细胞稳转细胞系，在药效持久性和杀伤特异性方面，初步探讨了不同MEK1/2抑制剂对NF1kd施万细胞的作用差异，为神经纤维瘤的靶向药物选择提供了实验依据。
本文编号：3243661
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