绿原酸对地塞米松诱导小鼠MC3T3-E1成骨细胞凋亡的保护机制

发布时间：2021-06-26 06:17

　　地塞米松是一种糖皮质激素类药物,广泛用于炎症、风湿性疾病和自体免疫性疾病的治疗。然而,长期大量使用地塞米松存在潜在的毒副作用,如抑制成骨细胞增殖,造成细胞内ROS的大量产生,诱导细胞凋亡。绿原酸是杜仲的指标成分,具有抗炎、抗氧化、抗凋亡和神经保护等生物学效应。但是,绿原酸对地塞米松致细胞凋亡的保护研究尚未见报道。因此,本文通过建立地塞米松诱导成骨细胞凋亡模型,探讨绿原酸对地塞米松诱导成骨细胞氧化应激和凋亡的调控作用机制,为绿原酸的临床应用提供理论依据。本研究采用小鼠成骨细胞系MC3T3-E1作为体外研究对象,研究地塞米松诱导成骨细胞凋亡的过程及PI3K/Akt通路和p21在其中发挥的调控作用。结果显示,地塞米松通过激活依赖caspase的线粒体凋亡信号通路,诱导细胞损伤和凋亡;同时,分别加入PI3K/Akt抑制剂LY294002和激活剂IGF-1,双向验证PI3K/Akt通路在成骨细胞凋亡中的作用。结果显示,地塞米松抑制PI3K/Akt通路的激活,下调Akt蛋白磷酸化水平,降低细胞中p21蛋白的表达和稳定性,促进p21发生核转位,调控Bcl-2蛋白家族Bax和Bc1-2的表达,促使cy... 

【文章来源】：中国农业大学北京市 211工程院校 985工程院校 教育部直属院校

【文章页数】：135 页

【学位级别】：博士

【部分图文】：

图１－６?ｐ２１?与Ａｋｔ通路的相关性（Ｋａｒｉｍｉａｎ?Ａ．?ｅ／ｏ／．，?２０１６，４２：６３－７１）??Ｆｉｇ．?１－６?Ｃｏｒｅｌｌａｔｉｏｎ?ｏｆ?ｐ２１?ａｎｄ?Ａｋｔ?ｐａｔｈｗａｙ??

和１?ｐＭ）地塞米松处理ＭＣ３Ｔ３－Ｅ１细胞２４?ｈ，以及相间浓度（１?ｐＭ）的地塞米松分别处理??ＭＣ３Ｔ３－Ｅ１细胞０，?６，?１２，?２４和３６?ｈ，采用ＬＤＨ试剂盒检测细胞培养基上清屮ＬＤＨ的释放量。??结果显示，随着地塞米松浓度升高，ＬＤＨ的释放量明显增加（尸＜０．０５或尸＜０．０１）（图２－２Ａ）。??如图２－２Ｂ所示，地塞米松作用６?ｈ仅有少量ＬＤＨ释放，与对照组相比差异不显著（Ｐ＞?０．０５），??地塞米松作用１２?ｈ、２４?ｈ和３６?ｈ时，ＬＤＨ的释放量极显著升高（Ｐ?＜?０．０１），说明地塞米松可??以引起ＭＣ３Ｔ３－Ｅ１细胞膜的破裂，且地塞米松的细胞毒性效应随浓度的升高和作用时间的延长而??增强。＿??Ａｌ?ｉ．２ｉ?以?Ｂ?１?２Ａｈ?＊＊??Ｃ?０．９－?＊＊?Ｃ?１．５－?＊＊??〇．〇Ｊ－＾Ｐ—??０?０．２５?０．５?１?０?６?１２?２４?３６??Ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ?ｏｆ?Ｄｅｘ?（ｆｉ?！Ｖ１＞?Ｔｉｍｅ?ｏｆ?Ｄｅｘ?（ｈ）??图２－２地塞米松对ＭＣ３Ｔ３－Ｅ１成骨细胞中ＬＤＨ释放的影响??注：数据是４个平行样本的平均数±标准差。与对照组相比，＊尸＜?０．０５，?０．０１??Ｆｉｇｕｒｅ?２－２?Ｔｈｅ?ｅｆｆｅｃｔｓ?ｏｆ?Ｄｅｘ?ｏｎ?ＬＤＨ?ｒｅｌｅａｓｅ?ｉｎ?ＭＣ３Ｔ３－Ｅ１?ｃｅｌｌｓ??Ｎｏｔｅ：?Ｔｈｅ?ｄａｔａ?ａｒｅ?ｐｒｅｓｅｎｔｅｄ?ａｓ?ｔｈｅ?ｍｅａｎ?土?ＳＤ?（ｎ＝４）．?＊Ｐ＜?０．０５

Ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ?ｏｆ?Ｄｅ＼?（ｐＭ）?Ｔｉｍｅ?ｏｆ?Ｄｅｘ?（ｈ）??图２－１地塞米松对ＭＣ３Ｔ３－Ｅ１成骨细胞活力的影响??注：数据是６个平行样本的平均数土标准差。与对照组相比，＊Ｐ＜?０．０５，?＊＊Ｐ＜?０．０１??Ｆｉｇｕｒｅ?２－１?Ｔｈｅ?ｅｆｆｅｃｔｓ?ｏｆ?Ｄｅｘ?ｏｎ?ｃｅｌｌ?ｖｉａｂｉｌｉｔｙ?ｉｎ?ＭＣ３Ｔ３－Ｅ１?ｃｅｌｌｓ??Ｎｏｔｅ：?Ｔｈｅ?ｄａｔａ?ａｒｅ?ｐｒｅｓｅｎｔｅｄ?ａｓ?ｔｈｅ?ｍｅａｎ?土?ＳＤ?（ｎ＝６）．?＊Ｐ＜?０．０５，?＊＊Ｐ＜?０．０１?ｃｏｍｐａｒｅｄ?ｗｉｔｈ?ｃｏｎｔｒｏｌ?ｇｒｏｕｐ．??２．３．２地塞米松对ＭＣ３Ｔ３－Ｅ１细胞ＬＤＨ释放的影响??为了检测地塞米松对ＭＣ３Ｔ３－Ｅ１成骨细胞的毒性，分别用不同浓度（ＯｐＭ、０．２５?ｐＭ、０．５?ｎＭ??和１?ｐＭ）地塞米松处理ＭＣ３Ｔ３－Ｅ１细胞２４?ｈ，以及相间浓度（１?ｐＭ）的地塞米松分别处理??ＭＣ３Ｔ３－Ｅ１细胞０，?６，?１２，?２４和３６?ｈ，采用ＬＤＨ试剂盒检测细胞培养基上清屮ＬＤＨ的释放量。??结果显示，随着地塞米松浓度升高，ＬＤＨ的释放量明显增加（尸＜０．０５或尸＜０．０１）（图２－２Ａ）。??如图２－２Ｂ所示，地塞米松作用６?ｈ仅有少量ＬＤＨ释放，与对照组相比差异不显著（Ｐ＞?０．０５），??地塞米松作用１２?ｈ、２４?ｈ和３６?ｈ时


本文编号：3250801